请问流式分选细胞在收集管中没有加液体会怎么样

starlancer

做FACS分选细胞的时候忘了在收集管中加入任何液体，在分选完了之后把细胞直接收集到空ep管中了，然后离心收集细胞的时候发现没有多少细胞沉淀。请问这个影响大吗，起初分离到的一部分细胞会不会干死掉？这样的话大概还能分选到多少细胞？有什么补救的办法吗？谢谢！

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回复 gandanxiaoyang 的帖子4 y+ Y  J. l/ f5 n0 o# Z0 _

) s  O# z4 |$ i0 O% s非常感谢啊 细胞还算多，但收集后离心没看到明显的细胞沉淀，我就加了200ul Trizol放在-80度冰箱里保存了。那这种情况用来提DNA还行吗？不知道分选时液滴能溅到多高，如果细胞溅的很高估计就没有泡在Trizol里，那就麻烦了。

starlancer

回复 gandanxiaoyang 的帖子* h8 k2 q1 l9 _- }/ ~$ k3 }. j

* @. G0 y! L  G) a0 D# Z& v我当时离心后倒掉上清液，估计损失了不少细胞和DNA，不过分的细胞总数还算多，估计用Trizol洗一洗的话能回收到一些。非常感谢！

starlancer

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回复 evial 的帖子
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$ C1 q1 \6 _0 A! f. @分离到了一二十万个 但离心的时候没看到什么明显的细胞沉淀，所以我当时就觉得有点不对劲了

starlancer

回复 evial 的帖子$ ]8 i$ g: ~8 M1 }, U0 n

9 U% G# u6 j. S3 z细胞应该是分到了 机器的型号忘了，是挺牛的一款，几十万美刀 我估计是有一部分细胞破碎了，损失了一部分

starlancer

回复 evial 的帖子& L5 ?$ ]2 ^5 F- X/ j6 R% q
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楼上是专家啊！我们这边的是BD FACS Aria 2型，貌似是比较常见的那种。操作人员的还是很有经验的，有十年以上的流式操作经验了。我后来问他说没有加收集液有没有关系，他说问题不大，但实验室其他人说必须要加收集液。后来我离心没有看到明显的细胞沉淀，所以就怀疑是分离的问题。现在看来即便是不加收集液，到最后应该还是能得到不少细胞才对。难道是我收集细胞沉淀时出了问题？

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回复 evial 的帖子0 _( Y! t; V  y3 I4 ^1 Z
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我估计最后收集的液体有500ul左右，但我离心时用200g离5分钟，就没看到明显的细胞沉淀。如果是以前在收集管中加液体的话，收集的细胞哪怕比较少在这200g离心10分钟都能收集到细胞的。这次没收集到所以就怀疑是分选的问题。

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回复 lxm5668 的帖子* s  e3 C$ z  s/ l- j' K2 d+ k3 p2 {, J
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就怕DNA溶解在液体里被倒掉了。200g的速度离心的，DNA是沉淀不下来的，溶解在液体里就都没了。。。哎，这次就做最坏的打算吧，下次注意就好

starlancer

回复 evial 的帖子' C; n" _2 ]! k3 j

# D$ f5 N  w8 n4 K' t5 x这个还不至于 细胞分了很多次了，就是我上次没加液体的时候出来问题，平时分到的细胞都没有问题的

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这倒也是 估计液滴滴下来的速度还不至于让细胞都破裂 估计还是离心的问题 另外细胞肯定也死了一部分，壁上挂了一部分，加上离心的问题导致收集到的细胞总数太少了