请问流式分选细胞在收集管中没有加液体会怎么样

starlancer

做FACS分选细胞的时候忘了在收集管中加入任何液体，在分选完了之后把细胞直接收集到空ep管中了，然后离心收集细胞的时候发现没有多少细胞沉淀。请问这个影响大吗，起初分离到的一部分细胞会不会干死掉？这样的话大概还能分选到多少细胞？有什么补救的办法吗？谢谢！

gandanxiaoyang

如果目的细胞含量很低的话，细胞的得率会受到很大影响，因为会不断干掉；如果比例高的话影响不会特别大，因为很快就会形成液滴。
8 e# R* p4 t' n. t: R# Q( y分选完毕了肯定无法再补救了。一般分选时接收管要加培养基或用含有FBS的液体浸润过夜。只能下次注意了。

starlancer

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' h# a. l7 M/ M" j1 H7 B
0 h: p  L+ F" w- a- ?非常感谢啊 细胞还算多，但收集后离心没看到明显的细胞沉淀，我就加了200ul Trizol放在-80度冰箱里保存了。那这种情况用来提DNA还行吗？不知道分选时液滴能溅到多高，如果细胞溅的很高估计就没有泡在Trizol里，那就麻烦了。

gandanxiaoyang

具体要看分选时液流角度了，不放心的话加入Trizol后摇匀管子，应该就不存在问题了。

starlancer

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4 M, P$ ~$ ^7 h" f7 p
7 D+ t& \. z1 l8 Y/ @我当时离心后倒掉上清液，估计损失了不少细胞和DNA，不过分的细胞总数还算多，估计用Trizol洗一洗的话能回收到一些。非常感谢！

evial

你分出来多少机器是会告诉你的呀，几十万的话离心应该能看到小点，几千个的话是看不到的。

starlancer

1 _) M5 R% U! H1 P) J  k, j- k' B& u, H& d8 k
回复 evial 的帖子! d# g3 a4 F) F8 o! D( u
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分离到了一二十万个 但离心的时候没看到什么明显的细胞沉淀，所以我当时就觉得有点不对劲了

evial

这个量应该能看到的，分好了拿下来是要上下颠倒摇一下，可能有一点挂在壁上，但是不会太多。也有可能你的分选有问题，没有收集到细胞。用神马机器做的？

starlancer

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) T( Z+ U2 d0 Y+ J# M
( f! A& c  J9 q. H细胞应该是分到了 机器的型号忘了，是挺牛的一款，几十万美刀 我估计是有一部分细胞破碎了，损失了一部分

evial

市面上最好的是moflo XDP，好像有这个的升级版了，但不知国内有没人买。50万美金一台，现在可能便宜一点了。如果是这个分的话机器值得信赖，就是这个机器很靠人力，也就是操作人员的经验，没有经验的还是分不好，经验好的纯度可以达到95%以上。这个机器是不会把细胞弄碎的，液滴包裹细胞出喷嘴口，压力不会高到损伤细胞，除非是你射门的时候把垃圾圈进去了，而且版面上分到多少就是多少，是纯化的，除非有一点点挂到收集管壁上。