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[请教] 请问流式分选细胞在收集管中没有加液体会怎么样   [复制链接]

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专家 优秀会员 金话筒

楼主
发表于 2012-7-27 07:20 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
做FACS分选细胞的时候忘了在收集管中加入任何液体,在分选完了之后把细胞直接收集到空ep管中了,然后离心收集细胞的时候发现没有多少细胞沉淀。请问这个影响大吗,起初分离到的一部分细胞会不会干死掉?这样的话大概还能分选到多少细胞?有什么补救的办法吗?谢谢!
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沙发
发表于 2012-7-27 10:48 |只看该作者
如果目的细胞含量很低的话,细胞的得率会受到很大影响,因为会不断干掉;如果比例高的话影响不会特别大,因为很快就会形成液滴。
8 e# R* p4 t' n. t: R# Q( y分选完毕了肯定无法再补救了。一般分选时接收管要加培养基或用含有FBS的液体浸润过夜。只能下次注意了。
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藤椅
发表于 2012-7-27 11:19 |只看该作者
回复 gandanxiaoyang 的帖子
' h# a. l7 M/ M" j1 H7 B
0 h: p  L+ F" w- a- ?非常感谢啊 细胞还算多,但收集后离心没看到明显的细胞沉淀,我就加了200ul Trizol放在-80度冰箱里保存了。那这种情况用来提DNA还行吗?不知道分选时液滴能溅到多高,如果细胞溅的很高估计就没有泡在Trizol里,那就麻烦了。
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板凳
发表于 2012-7-27 11:51 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
具体要看分选时液流角度了,不放心的话加入Trizol后摇匀管子,应该就不存在问题了。
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报纸
发表于 2012-7-27 12:02 |只看该作者
回复 gandanxiaoyang 的帖子
4 M, P$ ~$ ^7 h" f7 p
7 D+ t& \. z1 l8 Y/ @我当时离心后倒掉上清液,估计损失了不少细胞和DNA,不过分的细胞总数还算多,估计用Trizol洗一洗的话能回收到一些。非常感谢!
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地板
发表于 2012-7-27 12:33 |只看该作者
你分出来多少机器是会告诉你的呀,几十万的话离心应该能看到小点,几千个的话是看不到的。
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发表于 2012-7-27 21:38 |只看该作者
本帖最后由 starlancer 于 2012-7-27 21:49 编辑
1 _) M5 R% U! H1 P) J  k, j- k' B& u, H& d8 k
回复 evial 的帖子! d# g3 a4 F) F8 o! D( u
% ~1 B+ H0 b% C) `% n
分离到了一二十万个 但离心的时候没看到什么明显的细胞沉淀,所以我当时就觉得有点不对劲了
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发表于 2012-7-28 21:22 |只看该作者
这个量应该能看到的,分好了拿下来是要上下颠倒摇一下,可能有一点挂在壁上,但是不会太多。也有可能你的分选有问题,没有收集到细胞。用神马机器做的?
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发表于 2012-7-30 08:57 |只看该作者
回复 evial 的帖子
) T( Z+ U2 d0 Y+ J# M
( f! A& c  J9 q. H细胞应该是分到了 机器的型号忘了,是挺牛的一款,几十万美刀 我估计是有一部分细胞破碎了,损失了一部分
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发表于 2012-7-30 10:26 |只看该作者
市面上最好的是moflo XDP,好像有这个的升级版了,但不知国内有没人买。50万美金一台,现在可能便宜一点了。如果是这个分的话机器值得信赖,就是这个机器很靠人力,也就是操作人员的经验,没有经验的还是分不好,经验好的纯度可以达到95%以上。这个机器是不会把细胞弄碎的,液滴包裹细胞出喷嘴口,压力不会高到损伤细胞,除非是你射门的时候把垃圾圈进去了,而且版面上分到多少就是多少,是纯化的,除非有一点点挂到收集管壁上。
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