求助！EB不贴壁！

ligangtiancai

如题，我在EB诱导过程中遇到几个问题：我用1*10*5/ML的密度将iPS细胞悬浮在低粘附的6孔板中，可形成的EB周边不够圆滑，感觉像是有很多的死细胞，而且悬浮5天后转移到铺明胶的板中后几乎没有贴壁的EB。查了一下大家说可能是iPS状态和EB质量的问题，可是我的iPS状态一直都不错，呈边缘透亮的卵圆形，可形成的EB边界总是感觉不够清晰，死细胞很多（悬浮和悬滴都试过，都是一样），不知是什么原因？谢谢！

ligangtiancai

回复 zmm 的帖子; c. `" E! _! f! n" M, X

% `5 C4 Q1 I  X  R. E; e培养基是高糖dmdm+20%FBS+1%NEAA+1% L-Glu  都是PAA的，之前用过10%和15%的FBS，结果也类似。iPS消化约2分钟，不知是不是消化的问题，但同一瓶中的细胞传代后生长良好

ligangtiancai

回复 zmm 的帖子
5 ]$ m. l; M$ a6 y! b6 g, E/ K/ ]
) r* c1 [: _0 _9 {% t" X3 {1 @我这个是诱导分化时的培养基。培养EB我用的是corning的低粘附板，主要是在悬浮5天后需要贴壁培养时EB不贴壁

ligangtiancai

0.1%明胶包被30分钟

ligangtiancai

回复 frankieisme 的帖子, N. e6 r6 R/ l
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恩，我觉得你说的挺对。应该还是EB本身的质量不太好。不过我的iPS一直状态还有不错，难道问题出再EB的制作上，能告诉我一下你制作EB的详细过程么？