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我也是一知半解，没有做过系统的实验验证，我觉得这个问题可以从这个角度解释：! j3 {1 E; w m' X" Q2 m- F
1. 产生holiday junction的整合方法一般是由原核的RecA介导的同源重组，是一种消耗ATP的寻找同源区的重组方法，并不适用于非同源重组。! T* ~. Y* ~, p1 a- z g' r7 k
2. “环状质粒整合位点是不确定的，它可以从任何质粒位点整合到基因组中，而线性化的质粒则不会"的确是有这样的原因，但我觉得质粒超螺旋结构的影响还是主要的。动物细胞里面有拓扑异构酶，可以帮助自己基因组解旋，但是质粒就不一定能解旋了（原核的聚合酶自己能解旋，所以不需要拓扑酶）。这样的情况下外源的质粒的转录效率（一般能重组的非同源质粒都是有病毒元件，需要先转录才能整合）肯定是线性的高。- B: d0 v8 [8 L+ g
3. 选的那两个酶，估计都是现在流行的质粒backbone上没有的酶才能用，病毒载体比较大，酶切位点相对比较多。 |
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发表于 2012-8-9 05:12
