小鼠胚胎移植

yangpan521

哪位做过小鼠胚胎移植，并且已经成功获得健康后代的，请教有什么技巧，本人按小鼠操作指南做了几次，没有怀孕的，也不知道在那个地方出错？

zpzp0312

感觉那里做不好？

jhu132llh

1.孕鼠周期与胚胎时期大致吻合- J. r; u' D5 r6 z/ a1 W% q7 m
2.胚胎活率! n" B3 b) X) u
3.移植胚胎数和移植位置
% J* H6 i2 Y6 v4 a4,品系

夜帝

目前在做冲卵，把输卵管全部和子宫一部分剪下后置于显微镜下，寻找输卵管伞端，各位大师有没有什么好的方法教我

细胞海洋

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zhoujiang

你先确定胚胎是否移植进去了，可用受精卵进行移植，移植后即刻回收冲卵，如果没问题了，再考虑其它因素。

小刺猬2932056

这个要确定是否移进输卵管了，还有胚胎的质量，受体鼠大小及脂肪垫的大小等，还有操作时最好不要损伤输卵管和卵巢，好多细节需要注意，我记得刚开始好几次也都没有小鼠出生，后面多练习就好了，希望你早日成功

小刺猬2932056

回复 夜帝 的帖子) C$ z- K1 j: q* |, ~9 I5 Y8 ?: l% K
8 g4 }4 D/ `5 N
多练，可以拿别人冲过的来练，看的多了自然就很快能找到了

huozhicb

回复 yangpan521 的帖子( ^* G9 v! j7 N( j
2 [6 i8 n3 o6 U: T8 f
你选择的是体内成熟的卵母细胞还是体外成熟的卵母细胞？二细胞移植还是囊胚移植？最好把你的实验描述清楚一点才好交流呀：
* ~0 Z) }2 A+ ?3 `1、体外成熟的卵母细胞胚胎发育能力较低，但是不管是体内成熟还是体外成熟，最好先做个胚胎培养，看看囊胚率。体内成熟+体外受精的囊胚率90%左右；体外成熟+体外受精的囊胚率50%左右应该比较容易获得后代的。& |4 n8 t! d* d4 g, L1 r8 x
2、胚胎移植要的就是速度，尽量减少胚胎在体外等待的时间，我是把前期的手术操作都先做完，再去培养箱拿胚胎的。9 a" }' ^2 h% d8 c. Z1 ?
3、根据不同实验组胚胎的存活率（或之前的囊胚率结果），控制好最后可能存活的后代数量（8个左右）：体内成熟+体外受精的二细胞胚胎一般移植15个胚胎；体外成熟+体外受精的二细胞胚胎一般移植20个胚胎；存活的胚胎太少的话，剩下的胚胎也会流产的。. L- m2 F8 x- ~2 p2 C
4、移植的时候不要注入太多的培养液，前后两端的气泡和各个胚胎紧紧相连，气泡直径不要太大，有300微米就足够了。
: [7 z& R3 z$ H: Q5、移植结束后维持移植管的正压，避免胚胎被倒吸进移植管。

yangpan521

体外培养小鼠卵泡发育成为卵母细胞，对温度的要求高不高，请指教。