请教如何用磷酸钙法包装慢病毒啊？

hhs359853381

请教如何用磷酸钙法包装慢病毒啊？谁有具体的实验步骤求一份

igdb

按照厂家提供的PROTOCOL就可以。。碧云天的就不错，挺好用的。而且很便宜。

shy8610

楼上正解

刘森泉

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# j6 {  b6 B' {% F% n# n
6 j% C3 m& B* J" q  T我用碧云天的磷酸钙转染试剂，按照说明书做的，将质粒DNA加到100ul氯化钙里，再加到100ulBBS中，8h换液，第二天发现细胞还在增殖，转染前70%，第二天长满了，而且细胞还是很多触角的，没有变圆。这是怎么回事？谢谢。

igdb

回复 刘森泉 的帖子5 F, ~3 \+ a/ i/ L

( ^! m  `9 n  i* r谁说的转染后细胞就不长了？？你转染的是293嘛？磷酸钙法只适用于293细胞系。如果是293的话，细胞长出触角说明状态不好了。。培养过程中不要加抗生素。/ P. e7 y7 S- P$ j
. j, R* ], I4 D# C4 P
关键问题是，你的转染效率怎样？？

刘森泉

回复 igdb 的帖子" ]3 k! W" _2 w) a" ?% q0 J' c
, Q  Y6 ~. i# i6 U+ g& Y3 o" O
转的是293，第一天还会长，第二天就不长了，转染效率比较低，大概60%左右

linda9958

磷酸钙转染293一般都能达到80%，所以转染的试剂都可以自己配的，2MCaCl2，还有2XHBS（8.0 g NaCl 6.5 g HEPES (sodium salt) 10 ml Na2HPO4），一6cm皿为例：加入10ugDNA+438ul H2O + 61ul CaCl2混合，再加入500ul 2XHBS，混匀加入细胞中，6小时换液，加入含甘油的1XHBS休克30秒到2分钟，然后正常培养即可。整个过程的培养基可以有血清，有抗生素~

kaphila

我一般在50%时做转染 16小时后换液 那时细胞大约长到80% 个人认为细胞长满的话不太好

nculsa747

磷酸钙转，效率怎么也得有90%左右吧。