有谁用过Promega的PGEM-T-Easy载体，货号：A1360？为什么我直接用载体1ul,# H y6 H |& U
去做转化和蓝白斑筛选，平板里既可以看到蓝斑也可以看到白斑克隆？另外我PCR产物265bp大小，做TA克隆，提质粒酶切鉴定后，一直连接不进去？但是以500bp大小的质粒连接，就很容易能够挑选到克隆！为什么呢？说明一点：500bp质粒是promega-T 载体提供的；PCR是用mix做的，mix中是否为Taq酶不知道？同时做了对照，在mix中额外加入了1ul维格拉斯的Taq酶。效果不额外添加酶，PCR条带清晰，额外加酶的条带有点儿模糊，同时做了，PCR产物直接连接，PCR产物乙醇沉淀后连接，转化均能长克隆，挑选后酶切鉴定不对？接下来我该怎么做？8 M$ t) T I6 Z( w, C
说明：该PCR试剂盒DNTP，酶，引物都在一起，一个反应体系25ul， 50次的盒子，卖家6000多，我想知道引物序列，但是该盒子，引物该为简并引物，PCR条带大小为265bp-271bp。请各位大侠给点儿指点！
发表于 2012-8-16 11:10
