原核注射用的是Eppendorf Femtojet 5247，不会调参数

小刺猬2932056

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4 J  O0 \0 p9 j2 d# J: k9 w请教各位  本人刚开始做小鼠原核注射，用的是Eppendorf Femtojet 5247，不会调参数，总是会出现卵膨胀死亡的现象，在此请教各位高人，希望得到大家的帮助，多谢

小刺猬2932056

请问各位做原核注射的前辈 注射质粒的量怎么控制呢，是凭感觉还是用的显微注射器，希望有经验的给予答复，再次感谢

ywww111

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( _; D, D% v7 w1 ^( M# V  G; t) L8 d& M6 o4 i8 j
楼主也做显微注射？？？我刚开始做显微注射，
, g& g+ V9 u5 A1 n有问题请教楼主，希望楼主不吝赐教啊。
$ G7 J) l7 p" D/ \% G% `, o5 ~8 z# B1、显微注射用的微管是自己拉制的吗？拉制的参数是什么样的？我刚开始接触显微注射，; c8 j1 h6 U) M5 [, r. }6 S. v
微管的拉制都是自己做，但是口径掌握的不是很好，想向楼主请教一下微管拉制的经验；) [; i9 O. U( e- t  g8 {
2、拉制的微管在进行注射时，有时候不能刺进细胞，这是为什么？该怎样解决？
% T* M8 U! A9 k4 ]! M  _; n如果楼主的回复对我有帮助将不胜感激啊

细胞海洋

回复 ywww111 的帖子4 y3 g# e  ~6 i# l5 \" A! o8 M- f
% @0 M8 P+ ^9 y6 c5 p) ~: C
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天极拾贰星

温度低 拉力大 拉出的针前端细长 其实转基因注射的时候 卵不是那么容易死的 拉完了针  在注射之前要在持卵针上稍微碰一下 让最尖的部分断掉 这样注射才不会堵针 注射后卵死亡的原因有很多种 一针尖太粗 导致细胞损伤较大  二是注射针扎到了核仁上 并将部分核仁带出细胞  三是注射量较大 将卵撑死 四是注射质粒的浓度较高 毒性较大

funking

lz的具体参数是多少  刚开始摸索参数时，Pi 30-40左右   Pc 10 左右  用手动模式   
1 R; A, E' q$ W5 w* `祝实验顺利！