大家看看我们的MEF细胞怎么样

水平梦

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这是我们做原代22小时后的照片  大家帮忙分析一下吧

crystal_xjw

能比较清晰地看到MEF细胞，但是感觉效果长的不是很好，也有些死细胞，也就是说MEF细胞的密度不高，不过也算可以的。可以作为以后的经验，自己积累养细胞的经验。

水平梦

回复 crystal_xjw 的帖子. c" [+ O% U5 Z$ ?

/ [4 f7 l/ d: s6 _6 j是密度不够吗？我发现死细胞太多， 以为密度太大了。操作应注意哪些可以死细胞啊，谢谢指教

crystal_xjw

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& y. y0 P0 |! V( V, s# T6 Q我的意思是你培养后形成的MEF细胞不是很多。这里的话操作因素会对培养有很大的影响，比如你太靠近火焰就烧死了（烫死了）；也有细胞破损的；在获取细胞的途中有损伤等。同时在培养前取适当量的细胞数目来培养，过多或过少都会有影响。

水平梦

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  X5 q) K' H* Y) \$ R嗯 谢谢，会不会是我们消化的原因，我们是边吹边消化，如果放在温箱里消化 我们发现有很多蛋清状的东西，是什么啊，

crystal_xjw

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7 _3 L5 d  z. ^3 G2 H8 `9 w4 M& [0 {2 d
消化过程中有可能蛋白酶会对细胞有损伤。一般消化的时候是在水浴中搅拌，有专门的机器。至于在温箱里消化有蛋清状物质，会是一些结缔组织或者其他的组织块被部分消化，就变成了蛋清状的东西，算是杂质，在培养细胞前取上清，不要有这些杂质。

wwy551

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你说的蛋清状的东西是细胞破碎后释放出来的核酸，蛋白等物质。长链的核酸又很容易缠绕其他的细胞，到最后就会看到一团粘稠的东西。消化的时候，单次消化时间不要太久，可以分很多次消化，这样可能会减少对细胞的损伤。( j9 p$ q% w4 c
还有你说的死细胞的问题，倒不见得是因为密度什么的，可能像上面说的消化分离过程中有损伤，也有可能是些非贴壁细胞（比如血细胞之类）。贴壁培养适合MEF生长，不适合的其他细胞类型就在培养过程中慢慢淘汰了。1 L8 u1 J# u) j

水平梦

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* V" a4 t: F' x' u, [& L" }6 |  f& N
嗯，可能是我们铺了板之后看细胞密度太大，就用抢吹了吹细胞，分了2个皿。