knockin 和knockout 分别是来做什么的?

626630192

看文献和听报道的时候经常听到knockin 和knockout 这两者词,但是一直不知道这两种方法的具体含义和所研究的内容，求大神指教?

maokai345

knock in是改变原有基因的表达，基本上是做突变，但是不破坏原有基因的完整性， 但是改变该基因的功能。  而knock out是敲除该基因，即是原有基因失活，其中又有保留原基因部分完整性和 不保留两种， 保留完整性通过剔除一部分序列但是保留该基因in frame读码框正确， 这样的情况可能产生domain negative效应；不保留完整性则打乱原基因读码框，使 得细胞产生non sence mediated decay而降解该基因mRNA，进而不产生该基因编码产物。

晴斗斗

点突变应该也是knockin吧

wzyhbfd

knock down 一般是利用shRNA来实现转录后的基因沉默(RNAi)，效率可以达到80%-90%，和knock out 的100%不表达是有本质区别。

wzyhbfd

knock in一般来讲是将基因导入到细胞系或者动物体内，knock out 一般是在基因组上实现基因的删除突变，一般是移码突变。knock out现在基本上都是利用TALEN或者CRISPR/cas9的技术，无物种和基因序列的限制且特异性好。knock in 可以先利用TALEN 技术造成移码突变，再利用构建的同源模板上的点突变或者基因的替换实现基因的插入。

核糖体

l楼上说的对！

lxm5668

我认为楼上“cellman” 回答的比较准确。“knockin就是把一个外源目的基因转进细胞并整合到细胞基因组上，而knockout就是把细胞基因组上某个特定的基因删除”。而不是“drgaoh”说的“通过增强和削弱基因的表达来研究基因的作用的”，这里的in和out不是增强和削弱的意思，而是“有”或“无”的作用，knockout与经常看到的“knockdown”即所谓的“敲低”不同，是用一些基因打靶等手段将基因剔除掉了。
5 G7 d0 R* C! l6 k" e, ?- U5 x4 [不好意思，有点较真了啊！

drgaoh

: d& g+ s; ]0 h3 U$ Z$ \# \
1 H4 v* g/ b3 W1 n) D: j
回复 626630192 的帖子
7 p1 D9 M8 \" E, Q
; [; I0 `  Y9 t/ B, V知道就行了，如果你要做的话可以进行详细的研究( e9 }: D8 y& A( R
主要就是通过增强和削弱基因的表达来研究基因的作用的

xgl200

那合格操作可是复杂去了

626630192

回复 cellman 的帖子- m) m% Y4 a5 i4 w# ?- G7 u
9 ~- L. H- F' T8 A* W8 {; @8 ^) ~5 O
里面具体过程是怎么操作的呀,我没找到具体步骤,好像和克隆不一样,求讲解啊....