神经干细胞贴壁形成sphere

zxq050729

大家好：
  M; S! E+ d  Q; P3 G3 y   我是养神经干细胞的新手，最近我养的一批神经干细胞，解冻的时候生长良好，传代后都形成sphere，我也不知道自己哪些地方出问题了，请各位高手指点指点，谢谢

zxq050729

应该不是sphere，而是聚集在一起了

细胞海洋

说明你的试验方法 最好附带图片

zxq050729

我传代的时候一般步骤如下。* w4 S% P7 b8 F1 n+ M- j" G/ @
1.用laminin包被板至少两个小时，放在37度培养箱中
- ~" u5 N- n( z2.取出培养箱中的细胞，将原先的培养液吸去，PBS洗一遍死细包。24孔板中加入200微升胰酶，大约看到细胞收缩明显的时候，立马加入喊血清的培养基终止。
: N. u/ M  Y/ C3.轻轻用200微升的枪吹打，然后将细胞吸出放到EP管中1300转离心3分钟，这时候将l铺板aminnin用PBS洗掉1 j- F* V4 S  ]/ ^
4 ，去掉上清，加入新鲜培养基，放入铺板的24孔板中培养。
# n* e: [, n9 S3 _0 U" @; M: w. n- D另外，我用的试剂都是从国外公司购买，应该不是这方面的问题

zxq050729

zxq050729

这就是

dianying

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: R9 r# p! [1 H
' p. X: v3 _* m* _不是sphere。

redmaple

回复 zxq050729 的帖子" y$ ^5 R: \/ Z, B" U
6 v0 S" ?6 {4 O( `' c) X
这不是sphere

bibottll

回复 zxq050729 的帖子5 O# `+ a: `, z5 H

- N: P7 B6 \( V3 j: h8 G+ @我也是新手，但是你这个形状很奇怪啊，你的实验方法和我的是一样的，但是我没出现过类似情况呀，坐等高手解答。。。

romanyuo

细胞贴壁未太牢固，胰酶浓度太高，消化过度。建议细胞铺均匀多养一些时间，稀释胰酶消化，提供更适宜的微环境给NSC。