神经干细胞贴壁形成sphere

zxq050729

大家好：
- T; ~8 c: |0 B: a" @( e$ i6 O   我是养神经干细胞的新手，最近我养的一批神经干细胞，解冻的时候生长良好，传代后都形成sphere，我也不知道自己哪些地方出问题了，请各位高手指点指点，谢谢

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应该不是sphere，而是聚集在一起了

细胞海洋

说明你的试验方法 最好附带图片

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我传代的时候一般步骤如下。
2 s4 a+ d" X# L) |3 H9 a% {0 C1.用laminin包被板至少两个小时，放在37度培养箱中
- B+ _6 r' U& r: P% u/ F2.取出培养箱中的细胞，将原先的培养液吸去，PBS洗一遍死细包。24孔板中加入200微升胰酶，大约看到细胞收缩明显的时候，立马加入喊血清的培养基终止。
( S" h- Y3 C: n- N3.轻轻用200微升的枪吹打，然后将细胞吸出放到EP管中1300转离心3分钟，这时候将l铺板aminnin用PBS洗掉
- X# H& b9 D# a5 z& D% G4 ，去掉上清，加入新鲜培养基，放入铺板的24孔板中培养。
8 s* d$ ]) ?& _' S' o  K! k另外，我用的试剂都是从国外公司购买，应该不是这方面的问题

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zxq050729

这就是

dianying

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# F$ Q1 z. Z; |: T8 r& R3 R  l% W. J+ l2 r5 r3 q! w
不是sphere。

redmaple

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4 y2 [* ~% n5 D6 O( M" H9 _0 x( U) ]" _6 F2 n- O; e
这不是sphere

bibottll

回复 zxq050729 的帖子7 ~* d: `$ u) Q$ J& X7 q1 M* h

7 r( J: C! u* ]! @$ z2 G我也是新手，但是你这个形状很奇怪啊，你的实验方法和我的是一样的，但是我没出现过类似情况呀，坐等高手解答。。。

romanyuo

细胞贴壁未太牢固，胰酶浓度太高，消化过度。建议细胞铺均匀多养一些时间，稀释胰酶消化，提供更适宜的微环境给NSC。