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神经干细胞贴壁形成sphere   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2012-8-23 09:40 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好:
  M; S! E+ d  Q; P3 G3 y   我是养神经干细胞的新手,最近我养的一批神经干细胞,解冻的时候生长良好,传代后都形成sphere,我也不知道自己哪些地方出问题了,请各位高手指点指点,谢谢
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沙发
发表于 2012-8-23 10:43 |只看该作者
应该不是sphere,而是聚集在一起了

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小小研究员

藤椅
发表于 2012-8-23 11:05 |只看该作者
说明你的试验方法 最好附带图片

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板凳
发表于 2012-8-23 11:20 |只看该作者
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我传代的时候一般步骤如下。* w4 S% P7 b8 F1 n+ M- j" G/ @
1.用laminin包被板至少两个小时,放在37度培养箱中
- ~" u5 N- n( z2.取出培养箱中的细胞,将原先的培养液吸去,PBS洗一遍死细包。24孔板中加入200微升胰酶,大约看到细胞收缩明显的时候,立马加入喊血清的培养基终止。
: N. u/ M  Y/ C3.轻轻用200微升的枪吹打,然后将细胞吸出放到EP管中1300转离心3分钟,这时候将l铺板aminnin用PBS洗掉1 j- F* V4 S  ]/ ^
4 ,去掉上清,加入新鲜培养基,放入铺板的24孔板中培养。
# n* e: [, n9 S3 _0 U" @; M: w. n- D另外,我用的试剂都是从国外公司购买,应该不是这方面的问题
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报纸
发表于 2012-8-23 11:21 |只看该作者

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地板
发表于 2012-8-23 11:27 |只看该作者
这就是
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发表于 2012-8-23 13:12 |只看该作者
回复 zxq050729 的帖子
: R9 r# p! [1 H
' p. X: v3 _* m* _不是sphere。
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发表于 2012-8-23 13:18 |只看该作者
回复 zxq050729 的帖子" y$ ^5 R: \/ Z, B" U
6 v0 S" ?6 {4 O( `' c) X
这不是sphere
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发表于 2012-8-23 14:33 |只看该作者
回复 zxq050729 的帖子5 O# `+ a: `, z5 H

- N: P7 B6 \( V3 j: h8 G+ @我也是新手,但是你这个形状很奇怪啊,你的实验方法和我的是一样的,但是我没出现过类似情况呀,坐等高手解答。。。
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帅哥研究员 热心会员

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发表于 2012-8-23 15:36 |只看该作者
细胞贴壁未太牢固,胰酶浓度太高,消化过度。建议细胞铺均匀多养一些时间,稀释胰酶消化,提供更适宜的微环境给NSC。
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