请教：EGF和bFGF的配制

Dongqin11

请教，最近要养一种神经干细胞。买了gibco公司的Hu EGF和invitrogen公司的bFGF，说明书上写得是用缓冲液加0.1%BSA配制，而且还要过滤。我想问一下，能不能直接用基础培养基DMEM/F12直接配制，能不能不加0.1%BSA。还有这种细胞因子过滤的话应该会有所损失的，据说滤膜会结合蛋白质。能不能粉末溶解后不过滤啊？求教高手，这个怎么弄？

jingjing

超净工作台内操作，细胞因子忌反复冻融，盐溶液对其活性也有一定影响，尽量用不含盐的缓冲液配制，还有需要注意PH值，偏碱性更适合NSC的生长。

生旦净末丑

可以 我们都是直接用PBS缓冲液稀释的 PBS 要提前过滤一下

xiaoqi

严格操控，缓冲液用前一定要确保无菌。长期保存的话，最好加入BSA。

jhu132llh

用含1%BSA的PBS溶解
. k& Q" |% |/ Z; ], F6 r" V8 n& E然后溶解细胞因子粉末9 `2 A9 q" l4 x* E
然后分装，-20度保存
" {9 e3 Z7 g* Z3 Y( |, @PS：
6 \& d  P; U& V/ I. P  R$ i6 Z1.1%BSA的PBS提前过滤除菌，最好新鲜配制，也可一次多配点分装后-20度保存，用的时候再解冻；) B$ ~3 C  h$ B% e+ A6 s( J
2.细胞因子粉末溶解前最好离心一下，保证所有粉末都在瓶底而不是到处都是；$ r, J. S: N& j, ]0 T
3.因子配好后最好分装，按照你的用量分装，每次解冻一管估计在1周至1月内用完最佳，解冻过的因子4度保存

Dongqin11

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3 r; r: M: S8 d7 d% o" ^. Y; H9 G
Thank you for your kind help!
( y2 m/ \! f+ K5 L9 l; [0 TEGF和FGF都可以用PBS稀释吗？加入培养基不会对干细胞的生长有影响吧？1 c- u8 {8 K# w1 i6 ?. C4 J  z  T

jhu132llh

回复 Dongqin11 的帖子9 C/ ^5 v0 f* d* f5 t

7 x8 ^- T) b4 ^5 H& r都是可以用PBS稀释的8 @2 P7 }  q0 ?# n
加入点BSA可以有效保护你的因子效价2 t% L  m: @7 R9 m1 M0 i4 d
PBS加入培养基是不会对干细胞生长有影响的

birdflubirdflu

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) R7 E' Q0 o4 @7 R2 N* Z0 l0 S5 [) C9 y
我就是直接用基础培养基DMEM/F12直接配制不过滤,用得还可以。不过，长期保存的话，还是建议加0.1%BSA.

小渝

最好是参照它给的说明书吧，不过我们实验室做的是先用去离子水溶解成母液，然后分装，再根据实验进度拿分装的母液进行稀释成工作液再分装，避免反复冻融，最好一次一管，工作液在4度下可以保存一两周都没有问题，我们是这样操作的，仅供参考。

huangcong1988

回复 jhu132llh 的帖子. n6 q! l+ W! H4 ]. A

. s  U, {' U1 L0 _1 c5 D' p不对吧？我看说明书上说是先溶解在tris-盐酸中，如果要冻存的话，再融在BSA中