请教：EGF和bFGF的配制

Dongqin11

请教，最近要养一种神经干细胞。买了gibco公司的Hu EGF和invitrogen公司的bFGF，说明书上写得是用缓冲液加0.1%BSA配制，而且还要过滤。我想问一下，能不能直接用基础培养基DMEM/F12直接配制，能不能不加0.1%BSA。还有这种细胞因子过滤的话应该会有所损失的，据说滤膜会结合蛋白质。能不能粉末溶解后不过滤啊？求教高手，这个怎么弄？

jingjing

超净工作台内操作，细胞因子忌反复冻融，盐溶液对其活性也有一定影响，尽量用不含盐的缓冲液配制，还有需要注意PH值，偏碱性更适合NSC的生长。

生旦净末丑

可以 我们都是直接用PBS缓冲液稀释的 PBS 要提前过滤一下

xiaoqi

严格操控，缓冲液用前一定要确保无菌。长期保存的话，最好加入BSA。

jhu132llh

用含1%BSA的PBS溶解7 n3 @0 F5 q+ {  U* J' x  N
然后溶解细胞因子粉末' J5 l3 q9 R; @
然后分装，-20度保存
5 @/ ?6 c' f0 j5 Z! F: V6 j1 h1 oPS：
4 [8 o3 P& y0 ~8 O6 i1.1%BSA的PBS提前过滤除菌，最好新鲜配制，也可一次多配点分装后-20度保存，用的时候再解冻；1 j3 l6 G" n0 A# f1 I* t8 n1 R- F( {
2.细胞因子粉末溶解前最好离心一下，保证所有粉末都在瓶底而不是到处都是；( [6 z- R# n) f4 I/ D) Y) L
3.因子配好后最好分装，按照你的用量分装，每次解冻一管估计在1周至1月内用完最佳，解冻过的因子4度保存

Dongqin11

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2 ^/ C, r0 D  H9 H, k1 r1 w$ w5 P9 F$ N' U" u7 W2 v
Thank you for your kind help!
1 y3 D+ x8 U5 o+ \% x" e: dEGF和FGF都可以用PBS稀释吗？加入培养基不会对干细胞的生长有影响吧？9 J3 T9 r9 J/ a2 Q  S4 s8 M1 a

jhu132llh

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, A4 a7 z( a" T! Y, I% X  P9 S
# O2 w/ R4 J9 U1 R/ G, h都是可以用PBS稀释的' Y; g5 S+ F6 q( f; k2 ~) f) \
加入点BSA可以有效保护你的因子效价: l: M  a- |, H+ d( E% v4 q
PBS加入培养基是不会对干细胞生长有影响的

birdflubirdflu

回复 Dongqin11 的帖子, }# @2 Y7 c1 [/ F' O
; y; n% a. ~8 O6 B# s
我就是直接用基础培养基DMEM/F12直接配制不过滤,用得还可以。不过，长期保存的话，还是建议加0.1%BSA.

小渝

最好是参照它给的说明书吧，不过我们实验室做的是先用去离子水溶解成母液，然后分装，再根据实验进度拿分装的母液进行稀释成工作液再分装，避免反复冻融，最好一次一管，工作液在4度下可以保存一两周都没有问题，我们是这样操作的，仅供参考。

huangcong1988

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& h+ u5 m6 O' }* n, S( c0 l: k& a不对吧？我看说明书上说是先溶解在tris-盐酸中，如果要冻存的话，再融在BSA中