请教：EGF和bFGF的配制

Dongqin11

请教，最近要养一种神经干细胞。买了gibco公司的Hu EGF和invitrogen公司的bFGF，说明书上写得是用缓冲液加0.1%BSA配制，而且还要过滤。我想问一下，能不能直接用基础培养基DMEM/F12直接配制，能不能不加0.1%BSA。还有这种细胞因子过滤的话应该会有所损失的，据说滤膜会结合蛋白质。能不能粉末溶解后不过滤啊？求教高手，这个怎么弄？

jingjing

超净工作台内操作，细胞因子忌反复冻融，盐溶液对其活性也有一定影响，尽量用不含盐的缓冲液配制，还有需要注意PH值，偏碱性更适合NSC的生长。

生旦净末丑

可以 我们都是直接用PBS缓冲液稀释的 PBS 要提前过滤一下

xiaoqi

严格操控，缓冲液用前一定要确保无菌。长期保存的话，最好加入BSA。

jhu132llh

用含1%BSA的PBS溶解
; \5 q, g& q/ p然后溶解细胞因子粉末
* T, W6 f. d6 p# Q5 j+ I然后分装，-20度保存, U" b6 `6 {9 l) m
PS：
9 h1 _& D# {" Z7 D/ A$ r" ?" d: Q  b1.1%BSA的PBS提前过滤除菌，最好新鲜配制，也可一次多配点分装后-20度保存，用的时候再解冻；# L/ y- `/ Z$ p- y- g) y
2.细胞因子粉末溶解前最好离心一下，保证所有粉末都在瓶底而不是到处都是；: Y7 M" Z& |2 g2 W% R
3.因子配好后最好分装，按照你的用量分装，每次解冻一管估计在1周至1月内用完最佳，解冻过的因子4度保存

Dongqin11

回复 jhu132llh 的帖子, w  c5 g+ Y" k, |

9 E* g! R# ~2 a& yThank you for your kind help!
/ d; ~. F' i! D& KEGF和FGF都可以用PBS稀释吗？加入培养基不会对干细胞的生长有影响吧？
0 p0 M" l5 D3 ~1 t: T

jhu132llh

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& C9 c: p4 W) J) m+ q& l" Y" H, J5 O( S4 v7 o: v
都是可以用PBS稀释的/ X7 y8 P% k4 T# A! m
加入点BSA可以有效保护你的因子效价! L" ]3 e5 S5 a( Y+ S9 q
PBS加入培养基是不会对干细胞生长有影响的

birdflubirdflu

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, F+ H% `1 a: g( X
  ~# W* \( a3 Q7 s# q' G我就是直接用基础培养基DMEM/F12直接配制不过滤,用得还可以。不过，长期保存的话，还是建议加0.1%BSA.

小渝

最好是参照它给的说明书吧，不过我们实验室做的是先用去离子水溶解成母液，然后分装，再根据实验进度拿分装的母液进行稀释成工作液再分装，避免反复冻融，最好一次一管，工作液在4度下可以保存一两周都没有问题，我们是这样操作的，仅供参考。

huangcong1988

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7 a" ]2 _( \" }( U5 }0 V1 }8 \' Z' X2 t
不对吧？我看说明书上说是先溶解在tris-盐酸中，如果要冻存的话，再融在BSA中