请教：EGF和bFGF的配制

Dongqin11

请教，最近要养一种神经干细胞。买了gibco公司的Hu EGF和invitrogen公司的bFGF，说明书上写得是用缓冲液加0.1%BSA配制，而且还要过滤。我想问一下，能不能直接用基础培养基DMEM/F12直接配制，能不能不加0.1%BSA。还有这种细胞因子过滤的话应该会有所损失的，据说滤膜会结合蛋白质。能不能粉末溶解后不过滤啊？求教高手，这个怎么弄？

jingjing

超净工作台内操作，细胞因子忌反复冻融，盐溶液对其活性也有一定影响，尽量用不含盐的缓冲液配制，还有需要注意PH值，偏碱性更适合NSC的生长。

生旦净末丑

可以 我们都是直接用PBS缓冲液稀释的 PBS 要提前过滤一下

xiaoqi

严格操控，缓冲液用前一定要确保无菌。长期保存的话，最好加入BSA。

jhu132llh

用含1%BSA的PBS溶解1 j+ X/ E  u- G! J3 c/ G
然后溶解细胞因子粉末! d; K. Z7 h' k- M& E: f4 `+ }- e
然后分装，-20度保存  t9 L! q6 p8 t/ J
PS：. {# ^1 H: W8 @
1.1%BSA的PBS提前过滤除菌，最好新鲜配制，也可一次多配点分装后-20度保存，用的时候再解冻；7 H) V# f' i- c
2.细胞因子粉末溶解前最好离心一下，保证所有粉末都在瓶底而不是到处都是；
3 W) h( V% E& `: U4 e) u! g# J3.因子配好后最好分装，按照你的用量分装，每次解冻一管估计在1周至1月内用完最佳，解冻过的因子4度保存

Dongqin11

回复 jhu132llh 的帖子3 a! c4 p3 |- c+ ?) E$ S9 ~! j
9 C" b! x, o' i
Thank you for your kind help! & u/ j/ j% H' ~2 L9 ]+ J. w
EGF和FGF都可以用PBS稀释吗？加入培养基不会对干细胞的生长有影响吧？
4 ^1 U7 U: i2 b$ X: \& c7 y

jhu132llh

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6 A5 a3 S. s/ W  q) k, q# R5 F
1 }% N9 e7 o! J% n+ B3 f都是可以用PBS稀释的
7 r4 m6 y) O4 a加入点BSA可以有效保护你的因子效价! c) g8 Q5 h# @7 N2 Z+ S
PBS加入培养基是不会对干细胞生长有影响的

birdflubirdflu

回复 Dongqin11 的帖子) c2 J% G. h, z  d/ l1 X; K5 U

. {4 s1 B) J, Y我就是直接用基础培养基DMEM/F12直接配制不过滤,用得还可以。不过，长期保存的话，还是建议加0.1%BSA.

小渝

最好是参照它给的说明书吧，不过我们实验室做的是先用去离子水溶解成母液，然后分装，再根据实验进度拿分装的母液进行稀释成工作液再分装，避免反复冻融，最好一次一管，工作液在4度下可以保存一两周都没有问题，我们是这样操作的，仅供参考。

huangcong1988

回复 jhu132llh 的帖子+ c6 Z$ t, h  b- |9 ^. i* R0 B% j+ G6 C
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不对吧？我看说明书上说是先溶解在tris-盐酸中，如果要冻存的话，再融在BSA中