刚取的大鼠原代神经干细胞贴壁分化了？

小渝

求助呀！各位大神，想请教下各位，我一直在做原代神经干细胞，但是这一次的细胞按照以前的方法取出来，培养一天就发现细胞成球大部分贴壁了，而且贴壁的球与球之间可见明显的轴突，甚至可以看到形态上类似神经元细胞或者胶质细胞的。我取得是E14.5d胎鼠皮层。百思不得其解，之前做的都没有出现过这种情况呀，还请高人解答下了，非常感谢！！！

Tim

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建议上图！

ruofan1982

是不是消化过了，变成了多角形了。建议消化时间缩短，用温和的Tryple试试。

jj2570782

估计是培养瓶的问题 最好能选用低吸附能力的

小渝

回复 jj2570782 的帖子- f! Y/ q' O7 w6 e, ?

/ F- ^% [; ]( g) d/ D呵呵呵，前辈可不可以推荐点低吸附性培养板呀？

小渝

回复 ruofan1982 的帖子% C" f" N6 j  M; S
! v8 q! G" u' D" U8 i" i
你好，谢谢你的答复，我的细胞都是机械吹打的，所以应该不是这个原因，后来我自己分析了下，可能是中的细胞密度太大，细胞聚集呈团，太重了就直接贴壁了。

zb_ming

建议楼主把步骤贴出来才能帮你分析，就是你自己做的每一个过程。一般情况下出现这种情况有如下几点需要注意：1、软脑膜剥离不够干净。2、血管组织、血细胞去除不净。要多洗几次。3、消化组织这一步问题多多，不好掌握，尤其是消化时间。建议楼主可以取消。我重来都不消化，细胞好得很。4、细胞吹打，这一步也很关键，吹打不够细胞不散，吹打过头，细胞容易死，而且贴壁多。5、再就是接种密度，如果楼主是初次培养神经干细胞，建议楼主严格按照细胞计数正规密度接种，如你所说，密度太大，不是细胞太重的问题，而是细胞缺养分的问题才容易贴壁。6、最后要怀疑或检查培养基有没有问题，比如细胞因子的终浓度是否正确，需要添加的其他因子是否正确，尤其是浓度是否准确等等。7、再有就是注意观察细胞过程当中，要轻拿轻放，不要有大的摇晃等等。8、最后还要检查培养箱，看看水是否干了，否则湿度不够。二氧化碳浓度是否是设置的浓度，还有温度等等（当然，这是应该是最先检查的，哈哈，因为不易出问题所以放最后）。因为楼主没有把你做的过程贴出来，不能具体帮你分析，能想到的就这些，希望对楼主有用。对了，还有最后9、就是天气原因，哈哈。夏天冬天最热最冷的时候细胞是不容易养好的啊，哈哈，时间长了楼主就会发现。

jj2570782

回复 小渝 的帖子4 P$ ^5 M' n, S. [! W9 Q! n8 C
9 N  O4 ~9 F! }2 {  X2 N# ~
试试国产的

小渝

回复 zb_ming 的帖子
. I/ Z* N( [3 O9 `. L- |1 X/ v0 d6 O2 i5 C
非常感谢前辈的分析，现在大概知道自己问题出在哪了，正准备再试试，非常感谢了！

小渝

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* y+ F0 _2 @0 W( f( k( F9 x谢谢推荐啵！