有谁从睾丸组织中分离过初级精母细胞吗？

随心

想从睾丸组织中分离出粗线期精母细胞，有谁知道具体步骤吗，睾丸必须是新鲜的吗？可以冷冻吗？可以的话在多少度冷冻？？？谢啦

490096812

回复 随心 的帖子
3 F% Z; @9 i2 i* X3 ^5 q% a6 L9 i9 s9 \% b% n6 B
对啊，冻存的话很多东西就改变了，细胞状态也不好，所以还是建议你采来了不要冻存，我们冻存是为了验证冻存后还能用，实际很少用的。你在低温下12小时是没有问题的

ying

其实我觉得你要是能找个助手就好了。助手帮你取，你来计时并且做spread。反正曲精小管要泡在低渗液里面半小时的。

ying

回复 随心 的帖子7 k* D$ u9 E: L- c% c
9 D) G3 I* P6 u9 w$ [3 f# ?) D
你要是取了之后第二天做的话，我建议你先做一下预实验：+ j/ O. p0 O- f: b- G
将曲精小管大约1厘米（很少）泡在500ul DMEM-FBS-PS里，放在4度。然后你第二天来做spread。我估计是可以的，不会死太多。但不知会不会细胞状态变差使得实验结果不真实。
+ n0 ~, o  Q9 P  t2 }- T. R
+ x9 k+ ^" ~2 w) |0 `我曾经将消化成单细胞的睾丸mix细胞放4度过夜，第二天用PI染色，发现比起第一天的大约20%死亡，第二天大约有50%死亡。我估计如果是曲精小管的话死亡率会低一些，因为消化成单细胞本来就会损伤细胞。

随心

回复 490096812 的帖子; g* h* F  c6 `% X' q& Q  P# [7 b

. R1 v% K* m) J* J" y4 {6 l就是这篇文章

随心

回复 ying 的帖子) R( U1 @  Y. S* f' S1 M$ {7 }5 \' H  Q
, ~. U3 q6 j7 v5 L
多谢，你的意见对我很有用，不过还有一个问题时，因为我的试验样品比如睾丸需要一天内都收完，没有时间每个样本都做spread，睾丸可以冻存吗，有方法吗。多谢多谢

ying

. N) m; o- g" y$ `* u
  C% P3 \* R8 r/ A! G) z回复 随心 的帖子
1 @) K# G. W8 Q3 ^& f4 A, ^3 U
6 s" s% P5 R% Y  ]% u9 B# q$ V混有其他细胞不可以做染色H2AX和Scp3染色吗？反正非四倍体期的细胞都是染色阴性，阴性得非常厉害一点背景都没有的。四倍体期里面粗线期的Scp3非常非常亮，而且H2AX是包裹着XYbody的极其显眼的一团，粗线期细胞绝对不会和细线偶线双线期混淆的。- U+ G( A9 e, W( @8 B& x& q5 \
我的经验是，曲精小管所有细胞一起做chromatin spread比较好做，要是分选成了纯的粗线期细胞，则需要至少10^6才能做出比较好看的图。10^5想做出来需要很有经验和技巧才行。你要是用FACS来分选的话很不容易分到10^6.用重力沉降的话肯定是不纯的，粗线期能有80%就不错了。( {4 l$ \8 w# A1 I9 ?& |
另外，那个给文献的童鞋文献很不给力，根本没看清楼主要什么。

随心

回复 490096812 的帖子
, q* A7 n! x' p* Y( k0 B$ W  ^3 p
你好，是这样的，我想做方面的东西，但是周围没人做过。所以只能多麻烦你了。
) {0 \0 t# x; H# q: Y* ?因为我的实验需要，当时采样时没办法直接做，如果不能冻存，现做我是没有时间的。所以就算麻烦我也要知道按照冻存的方法去做。请问你知道如何冻存吗？有文献吗或者操作步骤吗？: Z7 K  r; J8 b/ N* S, x- w% O

# E, Y, f7 E/ d6 _. T& o5 I再者我是想从睾丸组织中提取粗线期精母细胞，单独拿出这种细胞做涂片染色用。给您一篇文章，试验方法中有Preparation of meiotic spreads，但是他是新鲜组织的，不是冻存的。但是我也是要做SCP3和H2axa染色的。0 r& ^% ^; O* Q
2 }1 M' ?4 }: }7 H' k) z* P: k

9 q* n& [* d+ P' z4 K+ o+ F/ d+ M所以帮帮忙啦，，你知道怎么冻存吗？

490096812

可以冻存，但是太麻烦了，我们是放在PBS中加双抗，储存，几个小时没有问题，放到一个保温箱，里面放上冰袋，

随心

回复 490096812 的帖子. N+ F' y: v9 o, ]8 ?. Q2 l/ @0 Q

" R, @1 E2 H# B8 k* s0 q9 U9 g% q取到新鲜的睾丸组织（注意保存）/ m$ a  N+ m- {6 w
如何保存？必须保证新鲜的组织马上开始做还是可以冻存呢？
( V4 c) b  M" S, ~. c; S谢谢