有谁从睾丸组织中分离过初级精母细胞吗？

ying

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& O+ B3 `8 y$ |* ^' u8 v" i) s7 g回复 随心 的帖子4 U! l* l* T& I$ z; G
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混有其他细胞不可以做染色H2AX和Scp3染色吗？反正非四倍体期的细胞都是染色阴性，阴性得非常厉害一点背景都没有的。四倍体期里面粗线期的Scp3非常非常亮，而且H2AX是包裹着XYbody的极其显眼的一团，粗线期细胞绝对不会和细线偶线双线期混淆的。
$ g0 w# T  B" p3 y  u" U我的经验是，曲精小管所有细胞一起做chromatin spread比较好做，要是分选成了纯的粗线期细胞，则需要至少10^6才能做出比较好看的图。10^5想做出来需要很有经验和技巧才行。你要是用FACS来分选的话很不容易分到10^6.用重力沉降的话肯定是不纯的，粗线期能有80%就不错了。
" S4 t) U! }. m4 Q另外，那个给文献的童鞋文献很不给力，根本没看清楼主要什么。

ying

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7 G+ H& L! b( @4 E你要是取了之后第二天做的话，我建议你先做一下预实验：1 p0 b' B3 {8 e8 W( e+ V! P
将曲精小管大约1厘米（很少）泡在500ul DMEM-FBS-PS里，放在4度。然后你第二天来做spread。我估计是可以的，不会死太多。但不知会不会细胞状态变差使得实验结果不真实。; r$ Q1 K! r( e$ }  i/ B
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我曾经将消化成单细胞的睾丸mix细胞放4度过夜，第二天用PI染色，发现比起第一天的大约20%死亡，第二天大约有50%死亡。我估计如果是曲精小管的话死亡率会低一些，因为消化成单细胞本来就会损伤细胞。

ying

其实我觉得你要是能找个助手就好了。助手帮你取，你来计时并且做spread。反正曲精小管要泡在低渗液里面半小时的。