传代遇到新问题

lmh_yixue

用trypsin（0.25%）消化传代的过程中，吹打成细胞悬液之后离心，弃上清，加入PBS重悬细胞洗细胞的时候为什么有些细胞吹打不开？成线样连接在一起。

shy8610

可能是没消化好，如果不是操作的问题，我更倾向是细胞状态的问题，良好状态的细胞，生长长势好，容易贴，其实也容易消化（不是容易脱落，两个概念）

yedanna

细胞浓度过大，还有培养时间过长就会出现这样的情况

lmh_yixue

谢谢大家！！

lmh_yixue

回复 wujh1986 的帖子
% G+ d$ U- c6 y' q
2 L5 s1 C, J: t2 o9 u谢谢！！

lmh_yixue

回复 辛西雅 的帖子. S4 p, R+ V& |5 O9 ]5 c5 L( ]7 \2 L$ K

4 S1 _9 N/ H' H" x' n8 k: i& l5 j传代的是子宫内膜间质细胞，离心后用PBS洗主要是为了洗去细胞周围的胰酶。

lmh_yixue

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. J: G( q& V( T% Q/ u
' V2 g; `, n9 K4 R2 G" P5 r- ~3 m( X谢谢

lmh_yixue

回复 qiuweiqin0618 的帖子  Z" t5 h1 k- j. h% E

% A$ L8 v, ]& W/ h嗯，以后注意

辛西雅

通常，当样本被反复冻融或在酶的消化解离作用下会生成“细胞团块”。这是由于实验环境压力使样本中的细胞死亡率升高， 导致死亡细胞释放“粘性的”DNA分子，这种分子会将周围的细胞黏连在一起结成团块。5 p2 }, H( ]+ k. T7 D0 }: I

辛西雅

你传代什么细胞，还需要离心再PBS洗的?直接在离心管里吹打的么，你将细胞转移到培养皿上再吹打看看