iPSC培养tip：Matrigel的包被[心得点评]

hjd8886

摘要：2 a# l6 l" A/ V/ w, _* V. k4 s
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　　在使用mTeSR™1培养hESC和iPSC时，STEMCELL建议使用BD Matrigel™ hESC-qualified Matrix（货号 354227）来包被平板。在Matrigel基质上，mTeSR™1可用于未分化状态hES细胞的维持和扩增，而不必添加其他生长因子。
( L8 L( q* f( |  x; c对于人胚胎干细胞（hESC）和人诱导多能干细胞（iPSC）的培养和维持，mTeSR™1是目前比较常用的一种胚胎干细胞培养体系。这种培养基配方最初来自WiCell™ 研究所，后由加拿大STEMCELL公司优化，是一种成分确定的无血清培养基。在培养时，它需要使用包被了基质的组织培养板，来支持细胞粘附和扩增。
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STEMCELL建议使用BD Matrigel™ hESC-qualified Matrix（货号 354227）来包被平板。在Matrigel基质上，mTeSR™1可用于未分化状态hES细胞的维持和扩增，而不必添加其他生长因子。mTeSR™1和BD Matrigel基质的结合使用可培养各种WiCell™ hES细胞系多至20代，因此mTeSR™1和hES适用的Matrigel基质, 作为优质培养液与表面的结合，创造了一种完全的培养环境以支持hES细胞的无饲养层扩增，为hES培养提供了一种标准化的培养方法。) ~( ^5 U3 E2 V( K3 e% i- R7 f+ u

% w5 j* j" @, ]+ Z3 r' }关于Matrigel的包被，STEMCELL提出了一些建议。首先，Matrigel的稀释应参照BD的产品插页中的介绍。BD根据每个批次的蛋白浓度计算出稀释系数。用户在使用前须查阅批次特异的分析证明书（COA），确定稀释系数。
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每块组织培养板必须完全、均匀地包被Matrigel，这一点很重要。在Matrigel未充分包被的地方，细胞不能正常粘附。避免不均匀包被的一种方法是让包被的培养板放在生物安全柜中，盖上盖子（以避免干燥），室温下静置1小时。如果您赶时间，可以将平板在37°C温箱内放置30分钟。确保生物安全柜或温箱搁板是水平的，并避免培养板叠成一摞。
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包被后的培养板应存放在2-8°C，最多一星期（由Parafilm™密封，以避免干燥）。确保电冰箱的搁板也是水平的。专家提醒，不建议使用Matrigel包被不均匀的平板，或Matrigel已蒸发的平板。
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: r* m9 F) \( ?* e如果干细胞培养时使用了TeSR™2培养基，则专家建议使用StemAdhere™ Defined Matrix for hPSC进行培养板的包被，而不是Matrigel。这种成分确定的完全培养基是mTeSR™1的升级版，不含血清，不含动物蛋白。
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0 a  m% i' j7 D* G- w1 nSTEMCELL还即将推出一种成分高度确定、无需滋养层细胞（feeder-free）的培养基TeSR™-E8™，它可与玻璃粘连蛋白（vitronectin）共同使用。（生物通 薄荷）
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sunny2829

不知道有没有人用过~~~
* A" ?# M8 o2 r我们一般都是用饲养层来培养，这样形态感觉更好，不易分化~~~

也行天下

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0 c5 I2 e! s' K9 @" i" Y请教一下：mTeSR1培养基和Matrigel胶对20代以后的hESC 或iPSC的培养有影响吗？是不是20代以后的细胞用mTeSR1培养基和Matrigel胶就不容易长起来了？

pingzongyunlan

我想问的是这种培养条件只适用于human stem cell and ips cell吗？小鼠的用什么？别的物种的又用什么培养液呢？新手上路。。。谢谢~

BDFCM

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) l. `2 G6 L% t% s3 l2 T6 ^人的干细胞最难养，小鼠的ES直接用gelatin包被就可以了，其他物种不太清楚。估计灵长类的和人的差不多吧

BDFCM

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1 P0 w/ q0 g  y) L6 h2 r  Z' z# A! y! ]) @
我现在HES都70代了，养在mTeSR1中，状态很好。

nculsa747

用过的说，关于matrigel使用，应用冷的培养基来稀释。Matrigel常做过渡使用，譬如为了除去MEF等，长期培养还是建议用feeder。stem cell的那个太贵，恐怕没有几个实验室能一直用它来养吧。

hjd8886

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  M6 Z+ }  [7 _% H* w5 h% a7 h我感觉都差不多啊，我都养到48代的ips，还长势很好啊

lchanlon

mTeSR1 was out! please refer to the paper titled"Chemically defined conditions for human iPS cell derivation and culture$ O' E9 f" y$ N) }5 b
", The new medium (E8) for ips or ES cell culture. It is a very good medium. you can prepare it by youself.
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补充内容 (2012-9-22 09:38):
5 H7 I# P( N! wYou can get the ingredient in the paper. In our lab, I make it by myself

BDFCM

回复 lchanlon 的帖子0 L& F1 p% [: J, ^3 x( v
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和mTESR比，成本会便宜吗？