关于MEF求助

haotongyang

最近在养MEF，用的25的玻璃瓶，高糖DMEM，老是养不好，请教几个问题1 P2 {6 I6 j& i: L6 n" O: V
1.同一批次做的，为什么不同的细胞瓶状态差很多，有的直接就死光了，有的生长挺好？) I& }8 p  b% z4 v: K2 ~0 R
2.同一个细胞瓶不同区域细胞生长状态差别也挺大的$ Z; T$ `& w3 D$ b' `
3.原代的还好，越往下传越不好. T, e) Z1 e" g
哪位高手帮忙分析下什么原因啊

jhu132llh

1.考虑你用的玻璃瓶，那么可能与培养瓶的状态有关系，如没彻底洗涤干净等等；
8 w2 l+ F. M  R: L8 c) s' d2.MEF最好是在P1-P3使用的，传代次数多了是会影响细胞状态；

褚cell

这些问题有时候会发生，但是你做MEF的程序没有给，也说不了是什么原因，和培养器皿有关系，但或许不是主要原因。

不倒翁

瓶子有问题么？ 或者你冻存复苏的过程是不是每一管细胞处理的不太一样？

haotongyang

回复 不倒翁 的帖子& B6 [% ]4 G) t" \3 t+ y

) j3 H9 E' j! C( ]4 D: e. a) L" z( i4 v我的MEF是自己直接用孕鼠做的，0.25胰酶消化，按照正常的程序走的，前面两次做的还可以，最近越做越差，找不到原因，所以请教一下。

小禾禾

回复 haotongyang 的帖子5 `+ v, l+ |' h. V- S" B4 ]1 X8 {: @

5 y; h; o( H+ z! I1.用玻璃瓶养，不太好吧。可能是每个瓶子处理不一样，所以导致贴壁率不同! X4 o/ ^( C% g4 |6 I
2.有可能是你没有把细胞摇匀，细胞分布不均匀，也会导致细胞状态的差别。
1 s) s+ f+ a$ `; q* @. r3.MEF细胞增殖能力是有限的，基本在第5代已经没有什么增殖能力了，所以要是做feeder的话，最好就选择3-4代的。

不倒翁

回复 haotongyang 的帖子
8 [" X3 c' |' E$ `& D3 o- f  y2 Q2 _3 F+ |7 u. d7 P+ O
我自己没有分过 但是我们用 一批分出来的MEF 有时候会配到一两管状态不是很好地 一般都是复苏的时候操作不当或者什么的

雪国叶子

MEF做饲养层一般用P3-P5代的，而且有时候有一两管冻存的细胞复苏出来会有很多死掉的。

yuhaoze

我觉得MEF很好养的，我都在P1就冻起来，这东西长得飞快。

琳茗

你是不是可以用用看15CM dish 养养看  我们就是用这个养的 养的都很好 画8字 细胞也很均匀