帮看看这个二抗是否坏了

gghywtfz

2012-9-25 13:45 上传

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8 L2 O# Y( K" @直接把二抗滴加到玻片上拍出来的效果，这个是不是算已经淬灭了

Donnies

如果全部是这种绿色荧光的话，有可能是细胞在处理的过程中碎了，这个时候抗体也会到处染成荧光的，确认二抗是不是坏了，你可以做另外一种细胞对照，如果也是这种情况，很可能是二抗出了问题，如果不是，可能是你之前做的细胞出了问题，如果所剩的二抗不多，可以再重新买一个新的二抗看看染色效果如何

gghywtfz

franklinhg 发表于 2012-9-25 19:19
' C  D* }: W2 Z# c  S1 G就只有一张图片 没有同型对照？那结果谁都说不出对错。 建议楼主： 1 略微介绍一下实验的过程；2 楼主如何确 ...

* T& L8 C4 h  Q/ }% v1 h
噢，我下面写的那句话你没看呢。
5 g( W+ T7 B, M  p5 w% r' a4 z
" \3 r: i% S/ R) C这仅仅是二抗直接滴到玻片以后的效果

gghywtfz

wnavy200299 发表于 2012-9-27 09:26
# h. H. \. I; f! V. o先用白光看看细胞形态是否正常，再用荧光观察。两者比较着看。你只传了一副荧光照片，没办法确认！

  d5 V# L! `0 A4 B9 z+ W. Z) ~
没有细胞啊！
2 E$ V1 g% W4 R& W下面不是说了，这是二抗直接滴加到玻片上拍出来的效果

xiongjiedeng

楼主最后做一个阳性对照吧，单纯看照片，不能作出最后的判断呀；从图来看，应该可以用

huangxf1998

从片子上看，二抗肯定没有坏，要不然不会有荧光。
; N/ ?, a. D) W6 d: y2 l" F' o检验方法：
( Z- `; Y, G0 }$ q1.一般情况下，免疫组化滴加二抗后，应该再洗一下（PBS,3次）然后再看。2 C4 y: u- }* Y- ^
2.加上DAPI，看看和细胞核的关系。
5 E; f% Y4 K: w4 j* o. v% Y3.做个没有一抗的阴性对照和肯定有表达的阳性对照片子。

wnavy200299

先用白光看看细胞形态是否正常，再用荧光观察。两者比较着看。你只传了一副荧光照片，没办法确认！

建关hh

我觉得楼主的意思是：这个图片是荧光二抗直接滴到载玻片上拍的，问的问题是这二抗还有没有用？

franklinhg

就只有一张图片 没有同型对照？那结果谁都说不出对错。 建议楼主： 1 略微介绍一下实验的过程；2 楼主如何确定自己的二抗坏了？3 提出phase contrast的图片，便于查看细胞是否正常（实验材料正常化，才可以尽量减低实验风险）。

jihaijie

说的太模糊了，你这不是有荧光吗