帮看看这个二抗是否坏了

gghywtfz

2012-9-25 13:45 上传

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: M! U: I% s( U+ X2 n& G
直接把二抗滴加到玻片上拍出来的效果，这个是不是算已经淬灭了

jihaijie

说的太模糊了，你这不是有荧光吗

franklinhg

就只有一张图片 没有同型对照？那结果谁都说不出对错。 建议楼主： 1 略微介绍一下实验的过程；2 楼主如何确定自己的二抗坏了？3 提出phase contrast的图片，便于查看细胞是否正常（实验材料正常化，才可以尽量减低实验风险）。

建关hh

我觉得楼主的意思是：这个图片是荧光二抗直接滴到载玻片上拍的，问的问题是这二抗还有没有用？

wnavy200299

先用白光看看细胞形态是否正常，再用荧光观察。两者比较着看。你只传了一副荧光照片，没办法确认！

huangxf1998

从片子上看，二抗肯定没有坏，要不然不会有荧光。1 U& D4 a1 a+ d3 g' |' q" J
检验方法：
, f5 n9 ^# E+ P0 N0 p0 R1.一般情况下，免疫组化滴加二抗后，应该再洗一下（PBS,3次）然后再看。8 J1 R5 {1 Z2 S/ c) N8 i
2.加上DAPI，看看和细胞核的关系。( _* I& R0 {- G# i
3.做个没有一抗的阴性对照和肯定有表达的阳性对照片子。

xiongjiedeng

楼主最后做一个阳性对照吧，单纯看照片，不能作出最后的判断呀；从图来看，应该可以用

gghywtfz

wnavy200299 发表于 2012-9-27 09:26
! r0 f6 Y  G' p. a6 |4 Z1 o  [先用白光看看细胞形态是否正常，再用荧光观察。两者比较着看。你只传了一副荧光照片，没办法确认！

' a' a5 ?6 k' t5 s% M
没有细胞啊！
( F# B$ o# I3 h4 I* ?5 N) `0 c  z, J下面不是说了，这是二抗直接滴加到玻片上拍出来的效果

gghywtfz

franklinhg 发表于 2012-9-25 19:19
( F& U- }( d. a' D2 T! ?3 j0 j就只有一张图片 没有同型对照？那结果谁都说不出对错。 建议楼主： 1 略微介绍一下实验的过程；2 楼主如何确 ...

& I* y, T! _8 G6 O6 d1 w
噢，我下面写的那句话你没看呢。
; }; [! V6 U+ _. c) K
! F* \1 C1 J. p( y. d- M0 A这仅仅是二抗直接滴到玻片以后的效果

Donnies

如果全部是这种绿色荧光的话，有可能是细胞在处理的过程中碎了，这个时候抗体也会到处染成荧光的，确认二抗是不是坏了，你可以做另外一种细胞对照，如果也是这种情况，很可能是二抗出了问题，如果不是，可能是你之前做的细胞出了问题，如果所剩的二抗不多，可以再重新买一个新的二抗看看染色效果如何