无血清培养的密度

liuwen

打算从肿瘤细胞系里筛选干细胞，最近在做无血清培养，用的是1640培养基在六孔板上培养，密度是5000个/ml。 但是一周以后也没出现细胞球，而且看起来细胞好像死了。 请问大家都用什么密度阿？

jojomayer

不知道你做的什么肿瘤的干细胞，我看过文献上胶质瘤的，一般是10的5次方到6次方个

liuwen

回复 jojomayer 的帖子
) a! g- u9 q; y8 m4 S! K0 l# b; E" x  y+ F! L; c
我的细胞是淋巴瘤的细胞系，试过10的5次方个，不怎么长，不知道是不是添加的生长因子不对

jojomayer

回复 liuwen 的帖子1 O' j( e8 H7 n( w6 L, d3 N, f

  q9 t: m& i" G" B你是什么配方？文献是什么配方呢？

wyeric

brain tumor stem like cells, 20ng/ml EGF,bFGF,2% B27, DMEM/F12 1:1 medium.

liuwen

回复 jojomayer 的帖子( P( o8 h% c2 P1 b9 E" g
( F: A5 L) b' [8 X8 B7 C
20ng/ml EGF,2% B27, 5ug/m Insulin. RPMI1640.没找到关于淋巴瘤细胞无血清培养的文献，而且我是犬的淋巴瘤

617507911

回复 liuwen 的帖子
3 r) ]- A! z( W( D3 g8 ]: Q
+ s( {. x* j! v; |! O  z/ m5 O我想应该是你接种的细胞密度太小了吧，其实细胞也有一定的密度依赖性，假如你接种的密度小的话，最好的情况可能就是细胞基本处于静止状态，或者基本上死亡。所以我觉得不是你的培养基的问题，可能主要原因还是在于你的细胞密度，可以大胆试试不同的密度接

李夏

回复 liuwen 的帖子6 R9 s; y+ Q! k9 X% S% X, D% u+ M* j1 z
6 D# n% G4 U3 [8 ?
我是每孔加1000-2000个细胞（六孔板），每孔在三毫升培养液，8-9九天可以有肿瘤求长出来，用的是康宁的低吸附培养板

malecow

不同的肿瘤细胞培养条件不一样，你得看文献是怎么培养的，添加哪些生长因子。

liuwen

回复 李夏 的帖子
- M4 I0 }9 h3 v8 k8 m6 U$ T" [" Z; c" ]/ t+ O) Y' \' N# `; v8 }) |
你用的是原代细胞还是细胞系？ 我的细胞是悬浮细胞系，而且细胞特别小