无血清培养的密度

liuwen

打算从肿瘤细胞系里筛选干细胞，最近在做无血清培养，用的是1640培养基在六孔板上培养，密度是5000个/ml。 但是一周以后也没出现细胞球，而且看起来细胞好像死了。 请问大家都用什么密度阿？

jojomayer

不知道你做的什么肿瘤的干细胞，我看过文献上胶质瘤的，一般是10的5次方到6次方个

liuwen

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* @) q9 q0 L( s& ]1 d; s我的细胞是淋巴瘤的细胞系，试过10的5次方个，不怎么长，不知道是不是添加的生长因子不对

jojomayer

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+ O" R. c, \4 g; Z4 i1 P# T) z4 _  M8 `4 Y) Y6 x) A% D
你是什么配方？文献是什么配方呢？

wyeric

brain tumor stem like cells, 20ng/ml EGF,bFGF,2% B27, DMEM/F12 1:1 medium.

liuwen

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: q0 g: \* O" m. |# l1 J3 f8 J* E) o
* v5 V0 Q% p9 V. K2 p2 i20ng/ml EGF,2% B27, 5ug/m Insulin. RPMI1640.没找到关于淋巴瘤细胞无血清培养的文献，而且我是犬的淋巴瘤

617507911

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# E7 U/ T  W- r+ F" F
: A- B! o4 i; h2 v4 P我想应该是你接种的细胞密度太小了吧，其实细胞也有一定的密度依赖性，假如你接种的密度小的话，最好的情况可能就是细胞基本处于静止状态，或者基本上死亡。所以我觉得不是你的培养基的问题，可能主要原因还是在于你的细胞密度，可以大胆试试不同的密度接

李夏

回复 liuwen 的帖子3 q: {$ M2 B, \# f4 C
& k2 j, n+ Q7 v# d0 {; ^6 B
我是每孔加1000-2000个细胞（六孔板），每孔在三毫升培养液，8-9九天可以有肿瘤求长出来，用的是康宁的低吸附培养板

malecow

不同的肿瘤细胞培养条件不一样，你得看文献是怎么培养的，添加哪些生长因子。

liuwen

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0 ~# v4 E3 N# f$ R  f% J( d5 E7 m- l
) X* C4 f( Y8 ~2 Q! O! x# K: d你用的是原代细胞还是细胞系？ 我的细胞是悬浮细胞系，而且细胞特别小