诱导iPS的慢病毒量应该是多少？

荣荣荣

诱导iPS用10 cm dish MEF ,那病毒用多少呢？是不是也同样是10 cm dish转染慢病毒各质粒之后收两次含病毒的混合液加到10 cm 里，不另加新鲜培养液，病毒需要纯化么？剩下的病毒培养液放于液氮可以吧。不浓缩。

zhusealin

要看你包装出来的病毒滴度是多少，一般可以按MOI 10:1感染，就是10个病毒颗粒感染一个细胞

第一心音

不同的细胞MOI不一样，成纤维细胞在20左右

荣荣荣

回复 第一心音 的帖子1 _1 O" D2 b- ^$ c" B5 `! z

+ C" H  z0 x4 h9 {( T% T& }+ u我如何测MOI 呢？荧光定量PCR?
$ [" J! _) o3 Z- F" ~# R还是用什么能看出来病变的细胞。

第一心音

这个简单，但是不告诉你了，你去看相关文献，不能说明都告诉你啊，授人以鱼不如授人以渔，好好看文献。同时建议版主加威望和包包，谢谢，呵呵

荣荣荣

回复 第一心音 的帖子) R' R' e1 t- ^" W* D

! ?* L7 E- f; W. v+ |/ S1 r你真有意思！我问错人了！

amazingt

MOI 10 以上会导致copy number很高，我最低用MOI 0.2也能成功诱导，而且重编程效率低不了多少，同时拷贝数只有1。希望自己摸索

sizhengliu

回复 amazingt 的帖子
3 f. U3 x0 r; U' L$ @: P; w
1 S0 `4 e8 t+ }9 i; `( ?/ Y你好！我们知道拷贝数可以理解为基因在基因组中的个数，而且慢病毒是不能二次感染的病毒，所以自然得出结论：如果细胞需要一个外源基因拷贝，至少得被一个病毒颗粒感染。那么，MOI为0.2时，如何得到一个拷贝数呢？

细胞海洋

回复 sizhengliu 的帖子6 P; N* [2 Q. }2 r3 t0 P

; F2 @# e% [5 |建议你发新帖提问

amazingt

回复 sizhengliu 的帖子
2 t+ T3 {! t! H* I$ d
1 F8 [  }+ Z) F( M! y当MOI低于1时，不是所有细胞都有机会被感染，但可以只要是被感染的细胞拷贝数必然大于等于1. 使用低的MOI可以有效的降低高拷贝数的几率，同时肯定会以降低效率为代价。