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1、从原代着手,要控制原代的接种密度和培养时间,最好能在2周之内传代,时间久了就算长的很好,也会出现一传就老的现象。
8 x9 l9 p% o. v. e) m8 j血清最好用进口的,浓度可以相对高一点。传代时细胞不易长的太满,80%左右为宜,这还是要根据个人经验。临床上用于治疗的自体干细胞,由于病人长期接受常规治疗(抗生素类),导致干细胞数量减少,接种密度要大一些。, f$ O$ a0 W5 G) G S' Q: ]
原代有杂细胞是很正常的,有集落就行,传代之后会好很多,第一次传代密度要大一点,否则很容易老化。
; B8 R& l4 U! y9 y* }2、老化跟胰酶消化也有很大关系,要协调好消化的方式、时间和浓度。尽可能减少对细胞的损伤。原代细胞比较杂,贴壁时间长,贴的比较牢,相对较难消化。有些不是干细胞的要舍弃,不要等全部消化下来,消化过程中注意观察。9 @, V7 d$ i' W% X1 l& L0 I* J
3、另外培养体系(温度、co2浓度、空气流通、ph值、培养液等)也很重要,要进行定期检测。 |
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