请帮我看看养的干细胞是不是老化了？还是污染了？谢谢

bty007

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, E' I$ c& q# n4 g9 O3 M我养的小鼠干细胞才传到第三代，感觉细胞就不太好了，是污染了吗？5 c2 J- o5 a* }$ p! x2 C
图里面发白的那种圆圈是什么？
( n: R, ^: g4 V; f应该不是死细胞吧？好像不动。。冲不掉。。。
' z5 V! l1 a, q& L是不是胰酶消化时间过长细胞易老化？我消化了四分钟吧% M) Q* f4 ^3 m, F) t! Q; o- a# U

. T% h, @' Q  i
3 s% U' n1 f# l6 o上面是小鼠颌骨骨髓间充质干细胞第3代" j* l3 p0 \, i0 K& L
下面一张是小鼠髂骨第三代的，长得形状也好奇怪' I* Z% r% c) o4 @$ S2 d' }

bty007

回复 若兰汀 的帖子* M- [2 v' x3 j/ ^: i

( w2 @( g. s& {8 g非常感谢哈~~听到这样说我就放心了，准备做检测呢，发现传代后细胞跟原代相差好大，都有点不敢做了

bty007

回复 若兰汀 的帖子9 e, t( n2 `# u/ z

4 c, z8 e/ p* {8 C嗯。。我只有原代24h后是半量换液，之后就都是全量换了，有时看到还有好多死细胞漂的时候就PBS冲下，细胞贴壁挺紧的，冲下没关系吧，不用冲的话自己感觉细胞容易污染，也不知道对不对？

bty007

回复 liuyul03 的帖子
5 `# G; h2 d9 c+ z% ^& z  i6 I* z( m. W7 j% v/ R
我就是奇怪为什么才3代细胞就老了。。。有必要加生长因子吗？' }/ \* v2 j" a! g* N* D2 e
发亮的有可能是混进去的杂细胞吗？我看的时候是发现亮的越来越多，就有点担心是什么污染混进去了

bty007

回复 Donnies 的帖子6 b8 u0 V0 R! a8 N

. D0 J. E: j2 [- W8 q( [: N- I+ {谢谢。3 Q# h( d/ v0 b( u  S
后来看貌似细胞恢复了点形态，有点儿立体的感觉了。。之后又传了2代，目前细胞还好，倒没有污染的浑浊的迹象，就是还会有圆圈的贴壁挺紧的细胞。。" ^9 q& O' j3 ~2 U
想想可能跟我中途换培养液有关，开始养细胞用的是国产的DMEM，后来换成Hyclone的了，可能是细胞不适应的关系才长不太好了

bty007

cuizhuzhu 发表于 2012-11-4 15:07 ) ~) M) O$ F' J9 q
回复 bty007 的帖子
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! K. f& v) M& ~& i" f" J, {0 \能分享一下你是怎么养的吗!我最近也在养郁闷死了，细胞一传代就死完了！单纯用胰酶能消 ...

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我用的是骨片培养法，取骨剪碎再胶原酶37度消化1小时，离心培养骨片的。0 a# k/ E$ }2 V4 t' {3 d) t- H7 T
细胞传代还是能增值的挺快的，就是纯不纯不好说了，细胞形态差别多，也不确定是不是一种细胞。1 J1 I- f" Z/ f$ L' r" x2 Z& H2 _
只用胰酶也可以消化的，干细胞对EDTA很敏感，用加它的胰酶消化细胞一定要离心，把EDTA去干净，否则对细胞不太好。

bty007

rhmm 发表于 2012-11-14 22:23 # T  `4 ?; `9 \. i3 p# C2 a, }4 F
应该是死细胞吧或者杂质，我曾经养过神经干细胞和脂肪干细胞，也是像你这种情形，而且如果真是污染的话上清 ...

! D1 ~6 i& @& `
不清楚是什么细胞，说是死细胞吧它却不漂。。贴的挺紧，而且貌似有增多的可能，但培养液却没有浑浊，应该不是污染吧，不知道是不是养出来的杂细胞

bty007

loveless 发表于 2012-11-14 22:39
3 D+ U7 x. S& g3 o回复 bty007 的帖子
4 _9 b: I+ S7 {5 K- V. _4 a$ L/ c; e/ D7 ?
楼主的细胞鉴定出来是间充干么？我养的也是这个样子，说是老化了，就给扔了····· ...

1 Q; i% ]$ Y/ Z
我还没有做鉴定，正在考虑怎么鉴定好，之前养的到p5 p6就老的不行了，不知道哪里做的不好。。。准备重新养到二三代就鉴定。
, {% ^, i9 i4 v. s; `/ D& ]我的P1应该还好吧，不知道图能不能看的到：

bty007

偶的细胞P5 p6代 没加什么因子什么的。。不知道是老的不成样子了。。还是自然分化了。。长得奇奇怪怪的。。求指教。。
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bty007

loveless 发表于 2012-11-16 10:25 . V1 z$ I- m2 b% C% J
回复 bty007 的帖子! p/ \7 i+ i5 e( J5 \5 |

. M! l$ g9 q6 i. m你这个P1养了几天了？有没有加生长因子？我的P1刚贴壁的时候也是这样的，但是细胞数太 ...

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呀不好意思，我对时间的时候发现17楼传的那张不是P1的，是P0第9天，我消化了换瓶养、打散细胞前拍的（原代长得不分散，有的地方很挤，有的地方很空）。
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消化了之后应该就是P1了吧，
2 T3 \0 K+ U% N0 W; C3 n" W3 T( r这是P1第二天：
: H0 d/ }! r2 T( M. U2 D  a6 g7 c% V! x6 r$ S$ I1 }

  M% v2 f) w% x  Y" s这些是P1第六天拍的：
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5 V/ J6 k; E4 D% M8 f0 k6 T" a3 s