有分离培养SD大鼠骨髓间充值干细胞的吗？

live861215

我现在做的是SD大鼠，刚开始做，我是用的是percoll液进行分离的，第一次没分离出来，第二次我配了1.090,1.077,1.067,1.055的梯度percoll分离，效果也不好，我每次用一只两周龄的SD雄性大鼠，能分享下你的经验吗？你采用的是什么分离方法。
' x8 }) k4 Q8 V. p/ u! y! U先说下我的方法吧：
) w% ^) D% d3 [1 D首先准备两个培养皿，分别加入无血清低糖DMEM12ml与6ml；然后大鼠脱臼处死，放入75%的酒精中5分钟，取出后，取大鼠前后股骨放入第一个培养皿中，并去除肌肉，转入第二个培养皿中，再用5ml的注射器吸取培养基冲洗骨髓，再收集第二个培养皿的细胞悬液于离心管中，1000 rpm离心15分钟，去上清，加入1ml无血清培养基重悬细胞，再在另一离心管中分别加入梯度percoll液（由离心管底部至上分别是高浓度到底浓度的percoll 2ml），最后将1ml的细胞悬液加在percoll上，3000rpm离心25min，出现一层乳白色的薄层，用1ml的移液器吸取这层细胞，将其加入到一新的细胞培养盘里，加入10ml含10%FBS的低糖DMEM中，于37°，5%的二氧化碳培养箱中培养。
' d& K8 ^: {3 ?+ s希望指教！  D; n/ ~& r# @) r1 B& p8 x( k: A
谢谢细胞海洋的建议！

live861215

回复 86964109 的帖子% j* [2 B+ t/ w4 g  d' ?9 l

9 B$ O9 t$ E; D  b4 u细胞少，长得慢，杂细胞也较多，你用的淋巴分离液Histopaque-1083是怎么分离的？结果如何？