求助human fetal mesenchymal stem cell 培养

zxh_890808

  有谁培养过人间充质干细胞？（此细胞复苏，传代，冻存的注意点有哪些?) 因为我即将培养此细胞,希望提前获取经验！！谢 谢
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我们这做MSC

zxh_890808

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呵呵，请问一下，就是间充质干细胞传代时，用含EDTA的胰酶消化后，要在进行离心吗？ 有文献说要离心处理，之前听师姐说离心会损伤细胞，请问你们实验室怎么做的啊！谢谢了   

sysuhoo

msc作为贴壁细胞，消化后是要离心的' T. L8 z+ H0 j! V6 `  e# j
至于你提到的细胞损伤，只要不超过1000rpm，对细胞的影响几乎可以忽视不及
4 K# N% `4 ?" \& K2 p8 r. R况且，你在原代用percoll分离的时候，离心的速率那更高了8 Y2 ]/ T4 d! C) N. Q/ m
对于人msc，没有特殊的交代，你就当贴壁细胞系养就没有任何问题

zxh_890808

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谢谢你！就是人间充质细胞用EDTA的胰酶消化时大概需要多长时间的？因为我们是买的细胞株，好贵的，所以我必须询问相关注意点···

sysuhoo

人的很好消化，一般不超过5分钟就能下来，放心做吧: C! ]( Y% ?9 w3 {- ]" w
不过就我所知，间充质干细胞由于本身的自我更新能力具有增殖能力，所以也不能说是细胞株; }. f, S# s; g
还是有代数限制的，所以当代数很高以后，多向分化能力会受到影响
& b% G$ ~0 S) {" l5 E( G' M建议你在代数较小时提前多冻存，另外传代保种的不要密度太高，否则也会分化

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; [" @  X0 N7 q; F我们这离心 主要是消化的时候对细胞的损伤大吧

zxh_890808

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非常感谢你的意见···呵呵···既然尽早冻存，我这样做可以吗，就是我复苏离心加培养液混匀后，就分为两瓶，等一瓶长得大概百分之八九十就冻存，另外一瓶长得差不多了就传代，然后相继冻存····

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嗯 你这样做比较保险

zxh_890808

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请问一下，你们人间充质干细胞冻存时，冻存液成分的比例是什么？！