求助human fetal mesenchymal stem cell 培养

zxh_890808

  有谁培养过人间充质干细胞？（此细胞复苏，传代，冻存的注意点有哪些?) 因为我即将培养此细胞,希望提前获取经验！！谢 谢
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我们这做MSC

zxh_890808

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& G1 j2 H  z( [( u5 |2 ^) W) P2 _7 z8 |+ [5 p
呵呵，请问一下，就是间充质干细胞传代时，用含EDTA的胰酶消化后，要在进行离心吗？ 有文献说要离心处理，之前听师姐说离心会损伤细胞，请问你们实验室怎么做的啊！谢谢了   

sysuhoo

msc作为贴壁细胞，消化后是要离心的" K. S$ c# H& [1 X3 A; H/ u$ }9 H
至于你提到的细胞损伤，只要不超过1000rpm，对细胞的影响几乎可以忽视不及( y6 H. t  A# Y$ b
况且，你在原代用percoll分离的时候，离心的速率那更高了
: J' g% `7 L, i0 g" J0 }对于人msc，没有特殊的交代，你就当贴壁细胞系养就没有任何问题

zxh_890808

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+ q( l$ ]& V% n$ k9 Q3 s谢谢你！就是人间充质细胞用EDTA的胰酶消化时大概需要多长时间的？因为我们是买的细胞株，好贵的，所以我必须询问相关注意点···

sysuhoo

人的很好消化，一般不超过5分钟就能下来，放心做吧
' G4 N, \5 L4 C! m. ?9 O不过就我所知，间充质干细胞由于本身的自我更新能力具有增殖能力，所以也不能说是细胞株$ a8 B  b: o+ k# h& V
还是有代数限制的，所以当代数很高以后，多向分化能力会受到影响" d$ M6 a  b1 z* w
建议你在代数较小时提前多冻存，另外传代保种的不要密度太高，否则也会分化

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回复 zxh_890808 的帖子. E# U; b& t6 N+ R0 ?
; f' f& T+ B% {) W; Z
我们这离心 主要是消化的时候对细胞的损伤大吧

zxh_890808

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; O& _* U' w+ s! Z% D6 w' D4 ]6 j3 @5 V
非常感谢你的意见···呵呵···既然尽早冻存，我这样做可以吗，就是我复苏离心加培养液混匀后，就分为两瓶，等一瓶长得大概百分之八九十就冻存，另外一瓶长得差不多了就传代，然后相继冻存····

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5 i$ X% c# y& |5 L; b0 s
- C: S+ m! V% U0 Z1 s1 u嗯 你这样做比较保险

zxh_890808

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- [6 @  h3 k0 @) _( F1 W请问一下，你们人间充质干细胞冻存时，冻存液成分的比例是什么？！