求助human fetal mesenchymal stem cell 培养

zxh_890808

  有谁培养过人间充质干细胞？（此细胞复苏，传代，冻存的注意点有哪些?) 因为我即将培养此细胞,希望提前获取经验！！谢 谢
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我们这做MSC

zxh_890808

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! p, g2 T) X! B8 p呵呵，请问一下，就是间充质干细胞传代时，用含EDTA的胰酶消化后，要在进行离心吗？ 有文献说要离心处理，之前听师姐说离心会损伤细胞，请问你们实验室怎么做的啊！谢谢了   

sysuhoo

msc作为贴壁细胞，消化后是要离心的: I: O: e! |. u
至于你提到的细胞损伤，只要不超过1000rpm，对细胞的影响几乎可以忽视不及1 e4 u# [# |* N4 _" c; X
况且，你在原代用percoll分离的时候，离心的速率那更高了
( T6 J+ R& b9 a1 Y; G3 M/ h) {对于人msc，没有特殊的交代，你就当贴壁细胞系养就没有任何问题

zxh_890808

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4 {7 w0 L: c0 @5 K0 P# e! T" W5 q+ N, f6 k* O9 f* t
谢谢你！就是人间充质细胞用EDTA的胰酶消化时大概需要多长时间的？因为我们是买的细胞株，好贵的，所以我必须询问相关注意点···

sysuhoo

人的很好消化，一般不超过5分钟就能下来，放心做吧6 }, S5 n, C8 A* \2 e+ |0 [
不过就我所知，间充质干细胞由于本身的自我更新能力具有增殖能力，所以也不能说是细胞株3 d. \- k) G5 Q" _5 U: S" g
还是有代数限制的，所以当代数很高以后，多向分化能力会受到影响
9 x0 @2 g1 Q- k. O建议你在代数较小时提前多冻存，另外传代保种的不要密度太高，否则也会分化

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回复 zxh_890808 的帖子% f& T8 O7 R) k% m

3 R  s+ m) G5 E我们这离心 主要是消化的时候对细胞的损伤大吧

zxh_890808

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7 m$ e7 v% ~9 k* W  ~# A' }+ E0 H7 l$ S
非常感谢你的意见···呵呵···既然尽早冻存，我这样做可以吗，就是我复苏离心加培养液混匀后，就分为两瓶，等一瓶长得大概百分之八九十就冻存，另外一瓶长得差不多了就传代，然后相继冻存····

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9 E0 N: ]0 D; ?" p6 @& ]
$ F: |3 A' f1 k' C( b! y3 y嗯 你这样做比较保险

zxh_890808

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$ v7 y1 x% l/ Q- ]( t9 I4 A  J( E& Y. a  \5 C4 h/ q/ z
请问一下，你们人间充质干细胞冻存时，冻存液成分的比例是什么？！