求助human fetal mesenchymal stem cell 培养

zxh_890808

  有谁培养过人间充质干细胞？（此细胞复苏，传代，冻存的注意点有哪些?) 因为我即将培养此细胞,希望提前获取经验！！谢 谢
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我们这做MSC

zxh_890808

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7 C- I2 _$ m' A. @5 x. f
) G+ d! o5 G  L2 X2 C* J9 m. u% Q9 K9 [: S呵呵，请问一下，就是间充质干细胞传代时，用含EDTA的胰酶消化后，要在进行离心吗？ 有文献说要离心处理，之前听师姐说离心会损伤细胞，请问你们实验室怎么做的啊！谢谢了   

sysuhoo

msc作为贴壁细胞，消化后是要离心的
( V6 w7 p: ~$ r/ Y- y至于你提到的细胞损伤，只要不超过1000rpm，对细胞的影响几乎可以忽视不及) L# G* Q; t: i  {. B
况且，你在原代用percoll分离的时候，离心的速率那更高了# \7 s) T1 w" _
对于人msc，没有特殊的交代，你就当贴壁细胞系养就没有任何问题

zxh_890808

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) v2 b) E: J8 P' |2 h# V谢谢你！就是人间充质细胞用EDTA的胰酶消化时大概需要多长时间的？因为我们是买的细胞株，好贵的，所以我必须询问相关注意点···

sysuhoo

人的很好消化，一般不超过5分钟就能下来，放心做吧
9 p0 t2 T6 D% s" r! b. F$ E7 C不过就我所知，间充质干细胞由于本身的自我更新能力具有增殖能力，所以也不能说是细胞株. \9 X: E. ]" g* x
还是有代数限制的，所以当代数很高以后，多向分化能力会受到影响" L' P: e7 L+ D7 M
建议你在代数较小时提前多冻存，另外传代保种的不要密度太高，否则也会分化

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) w( i8 |; J- j) C0 ?. ~
& H) X1 ]6 t$ U我们这离心 主要是消化的时候对细胞的损伤大吧

zxh_890808

回复 sysuhoo 的帖子6 w2 U* u. ?' n+ @) v
; q% m' l9 I- n$ N0 h
非常感谢你的意见···呵呵···既然尽早冻存，我这样做可以吗，就是我复苏离心加培养液混匀后，就分为两瓶，等一瓶长得大概百分之八九十就冻存，另外一瓶长得差不多了就传代，然后相继冻存····

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, K- o' P4 N" K9 l. w, N
嗯 你这样做比较保险

zxh_890808

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( I, l1 e) e1 y9 X' M7 W7 |& H; \* z* v+ P
请问一下，你们人间充质干细胞冻存时，冻存液成分的比例是什么？！