人胚胎干细胞培养新手请教

smartyyu

我是新手请教各位：1、新复苏干细胞多久可以看见新的克隆？有protocol说7天，是否必要等到7天才能判断复苏是否失败。2、1ml枪头刮下未分化的未经消化的克隆吹打10多次，有的克隆都成单细胞，有的克隆还是原来大小没被吹开，铺上卷边重叠。各位有何高见？谢谢了

smartyyu

谢谢各位了。下次加了消化液再吹打试试。可是还有个问题，加了胶原酶四放37度十分钟我也没发现有什么变化啊，20分钟我还是没观察到有什么变化，我新配的1mg/ml。应该怎么看啊？

hjd8886

我们实验室都是用200ul的黄枪头刮细胞的，你是情况是不是加的消化液如EDTA太少了，消化不均匀，或者是消化时间不足导致的吧。

辛西雅

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要消化后加上终止液，吹打，我们实验室就是培养人胚胎干细胞

南宫燚岚

人的胚胎干在常规传代培养时是不能吹成单细胞的！除非你用ROCK inhibitor处理过，而且1ml的枪头也不适合刮colony，我们都是用5ml的移液管

smartyyu

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0 m% W+ N2 v- B  d, p+ m  r回复 辛西雅 的帖子: {& i. {; o, Y" E: k( ]5 K% n
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我知道小鼠胚胎干细胞要吹成单细胞。但是人胚胎干细胞也可以吹成单细胞？

辛西雅

回复 smartyyu 的帖子, Y7 o( U- y! I

8 O  k2 u6 Z/ _! L+ o" I想传代培养的话，还是消化，加培养基后吹打成单个细胞按比例传，这样均匀一些，我们实验室都是这样传代培养的

smartyyu

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. J) ]6 j& h! M! C, o4 H: d谢谢了

smartyyu

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克隆挑出来接种到新的feeder上面，吹成小的克隆块继续传代培养啊，没想吹成单细胞啊

辛西雅

我想问你，未经消化的细胞为什么要吹打？没有消化的细胞总是会连成片，很难都吹打成单个的。