请教CIK细胞培养的最适温度及CO2浓度

zhuzhentulip

我们刚开始做CIK细胞的培养，CO2浓度设定的是5％，温度37度。新装的co2培养箱未做auto-start CO2浓度的校正，现在已经培养了四瓶CIK细胞了，才发现CO2浓度不准，叫来工程师，检察CO2浓度浓度超过10％了，要重新做auto-start，但需要16-24小时，已经培养的四瓶CIK细胞就没地方放了怎么办？

zhuzhentulip

我现在打算这样做，先将CO2浓度设定为0.1％，这样可以在实际10％的基础上下降（5％-0.1％=4.9％）4.9％，现在实际的CO2浓度就为10％-4.9％=5.1％，接近要求的5％。然后将已经培养的四瓶CIK细胞拿到别的好的co2培养箱中培养，然后在进行auto-start 校正CO2的浓度，等16-24小时auto-start CO2浓度校正完成后在把那四瓶CIK细胞那回来继续培养。你们觉得怎样

zhanglei1414

晕，你一开门一关门，二氧化碳浓度就下去了，既然设定是5%，实际是10%，那你就把门打开，散尽里面的二氧化碳，然后设定到2.5%，里面就是5%了

ljs

楼上的意见，个人不太赞同啊。理由是, h, k6 @7 }$ N: }7 e
1.不知楼主的实验室条件如何，开门不担心污染么？
5 \& y- h  x& `" z2.设置到2.5%，真实的浓度就是5%么？
6 L- L  z* B$ S) R( _% X我的建议是，既然楼主能测出气体浓度不准，说明你可以测CO2浓度。我认为安全的方法是：通过开门放气及充气，手动调节浓度到5%，然后关闭培养箱的门和CO2的开关。4瓶的细胞一夜是不会消耗多少的CO2的。而且培养液中的缓冲离子可以保护培养液的PH值稳定。个人意见，仅供参考。

zhuzhentulip

回复 ljs 的帖子6 N  N* a) ?! Z; D4 Z

4 t: }5 W% n2 `+ d* w% u. C3 q* @; r# K完全赞同，不过我们是这样做的，把4瓶细胞的瓶盖拧紧后做auto-start CO2浓度的校正，第二天auto-start 就完成了，在把CO2浓度设定为5％。就像你说的“4瓶的细胞一夜是不会消耗多少的CO2的。而且培养液中的缓冲离子可以保护培养液的PH值稳定。”只是细胞不生长或生长缓慢了。谢了。

zhanglei1414

回复 ljs 的帖子
. ^) X( r/ |+ M1 v0 s% p/ c3 ~* R3 G5 P0 p0 }" v, w3 ]  @
我打开培养箱的门，摆放一下细胞，时间稍微长一点，再关上门，门上显示的CO2浓度基本就降到0了，气体交换的速度非常快，不用打开很长时间专门放气，我把一个培养箱的细胞处理一遍，开开关关十几次，污染个细胞就那么容易啊？如果无菌操作熟练的人，不是故意污染，想非故意污染一次也不是那么容易！( ]* S- f8 j; N9 }& d) T
  }5 F, ^- L5 \* ~. D% T

) t) D, S* H  E; X+ S+ k8 u目前都是在寻找暂时的处理方法，楼主测的也不是准确的CO2浓度，大概调整一下把浓度降下来就行了，如果正规程序，应该是先转移细胞，再矫正培养箱的CO2浓度，然后转移回来！
& }: G3 j/ o. ~  R& v9 A) e) s  W1 F6 L+ E' k3 p5 |% d3 h8 [% D* [2 z
个人意见，仅供参开！

zhuzhentulip

回复 zhanglei1414 的帖子
9 ~; N: y8 f) C% m1 g7 t+ F% e6 w
7 e6 z) a7 Y( w; D! @7 v, V我当时也想过过段时间就把没打开一下，这样CO2浓度就回降下来。但晚上怎么办哦，如果不把auto-start CO2浓度的校正了，开关门不是长久的办法啊。

zhuzhentulip

回复 zhanglei1414 的帖子
5 H8 L2 R# T# M0 `2 D9 x
1 s0 R" h4 [, y4 ?) v当时我打开门后CO2的浓度是-3.3％，关上门后CO2的浓度要过很久才开始从-3.3％上升，说明0点还在-3.3％以下，是把我郁闷惨了，正规程序，的确应该是先转移细胞，再矫正培养箱的CO2浓度，然后转移回来！谢谢了