第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

回复 huangcong1988 的帖子$ Q0 l. O* Q7 t0 Y. t& t5 K0 I

$ R- l2 H% J* Q原代没冻现在打算没代就动，长得太快了这MEF

fwj81

我做的MEF第一代也很杂，现在是第2代，感觉好多了。胚胎成纤维细胞出来了。上图：

huangcong1988

回复 jun8013 的帖子) e( s& H1 I+ N. {6 z& s

; F" Y8 s& N$ G剪躯干干嘛呢？去头脚，内脏就行了，如果鼠小的话，还可以不去四肢，去头跟内脏就行。躯干剪碎的话，剪得越碎越好，剩下的东西再少的话，应该也能一到两个胚胎一个T75瓶，多了太浪费了，原代就冻，每代都冻，传一代冻一半。

jun8013

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5 G4 D4 P% J; G. f  {% W" [( r: m7 V9 J, w
我三个胚胎一个T75发现第二天就满了，就消化了，组织块用PBS洗了5次，感觉少了，不过后面消化传代发现是几乎没有了，所以慢慢消化看样是可以的，不用过目筛。
$ N2 ]: z* ~  R0 _5 ~5 O  F* I# j我培养基90%DMEM+10%FBS+2mM L-glutamine+P/S
- u$ d9 t: X4 x/ k& V; t全部过滤除菌，P/S Glutamine买成品，没过滤直接加

南宫燚岚

分离原代MEF最好用体视镜，这样可以保证较好的纯度。. e; T' B5 `1 U' K" J9 g
另外，分离完三四个胚胎之后就开始进行后续的消化等操作，不要等到十来个胚胎全部分完后在统一操作，胚胎活性不好分出来的MEF也会受影响，所以两个人流水线作业会比较好。关于铺板，我会2个胚胎铺一个T75，这样就不用第二天就满的不行要传代了……
* m) @5 P7 x9 n* G3 V$ j3 N贴壁后一天，我会用PBS洗一遍，大的组织块自然掉下来了，剩下的用真空吸管吸走，MEF增值能力强，会长起来的。而且传代的过程中组织块也会慢慢消失的。" C% R: \4 e% f3 u$ r
培养液的成分也挺重要的，不知道你怎么配的。

jun8013

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谢啦O(∩_∩)O~发现MEF长得好快啊，，，，，我几乎一天就的传。。。。

Donnies

你先把细胞传三四代之后，再看看结果怎么样，不同的细胞所需要的培养不同，像那些组织块，传三四代之后无法维持其继续生长就会消失的，另外传代的时候也需要注意一下，消化的不要太厉害，细胞一开始变圆就可以停止消化，不要等到细胞都漂起来了，再去终止

dilal

我一般做完原代就会冻存上一批，留上一瓶，传代到第3代后丝裂霉素处理，然后再冻存一批。

jun8013

回复 dilal 的帖子' A6 c! F3 `- J2 ^# K  G

4 n" y) }6 ?  j! A十分感谢指导~还有想请教下，P1保种好，还是P2好些。一个T75包几管合适。。。。

dilal

MEF原代时就会有很多杂细胞，传代2次后基本上就剩MEF了，所以不用担心，等你用第三代细胞是基本上已经很纯了