第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

南宫燚岚

分离原代MEF最好用体视镜，这样可以保证较好的纯度。( h  i4 ]7 H" n3 X! Y
另外，分离完三四个胚胎之后就开始进行后续的消化等操作，不要等到十来个胚胎全部分完后在统一操作，胚胎活性不好分出来的MEF也会受影响，所以两个人流水线作业会比较好。关于铺板，我会2个胚胎铺一个T75，这样就不用第二天就满的不行要传代了……( z7 o' N: O% ]7 I0 z- D) S$ ^
贴壁后一天，我会用PBS洗一遍，大的组织块自然掉下来了，剩下的用真空吸管吸走，MEF增值能力强，会长起来的。而且传代的过程中组织块也会慢慢消失的。
" C, b6 O& C$ v! W: w% d培养液的成分也挺重要的，不知道你怎么配的。

南宫燚岚

回复 jun8013 的帖子7 f0 y( s- x! }! ^! O9 o* N

& v; ~3 f+ e! x- m; B9 u1 JFBS最好灭活一下

南宫燚岚

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) @/ g; {# `% e6 q( L1 p+ ^: G
消化下来的细胞完全够用了，所以瓶底那些没掉下来的扔掉就可以了。0 P/ d; w  `0 V, Q* e2 Y
另外，不要让MEF长得太满，100%已经是上限了，只要90%以上就能传代，如果你发现MEF长得很快的话，那在传代时可以采取1:3以上的比例，然后舍弃一部分呗。
( t3 f) [+ W7 I8 K这是我分MEF时的图片：（不知为什么你们的都是紫色的？是CCD的关系么？）4 |/ }0 j. \: a: ]! ~
6 |* \; z4 ]) F6 P" o8 }
分完第一天，因为是体视镜分离，去头尾四肢，所以细胞数比较少" M# Y/ W5 @) B$ {" j; D

2012-11-14 08:56 上传

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$ I- |  X% B, Q) R0 W$ s# ?第二天就长起来了3 |9 p0 a! R$ H5 m" J, p  G" W9 H

2012-11-14 08:56 上传

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. Z, B, D- [8 [6 g3 j/ c, f第三天就该传代了& Y8 k6 D3 E, o' u/ x7 f+ [! Z

2012-11-14 08:58 上传

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原代第三天，需要传代了

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( n6 l. y; `  i6 ^; ]0 g% c% J两代过后，细胞纯度有所改善
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传代两次后