第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

南宫燚岚

分离原代MEF最好用体视镜，这样可以保证较好的纯度。8 c$ d5 T% A2 d; O7 Y
另外，分离完三四个胚胎之后就开始进行后续的消化等操作，不要等到十来个胚胎全部分完后在统一操作，胚胎活性不好分出来的MEF也会受影响，所以两个人流水线作业会比较好。关于铺板，我会2个胚胎铺一个T75，这样就不用第二天就满的不行要传代了……
' k+ c5 h& B7 j; X! J贴壁后一天，我会用PBS洗一遍，大的组织块自然掉下来了，剩下的用真空吸管吸走，MEF增值能力强，会长起来的。而且传代的过程中组织块也会慢慢消失的。% @8 O( Y, J8 m$ k
培养液的成分也挺重要的，不知道你怎么配的。

南宫燚岚

回复 jun8013 的帖子9 V5 m# |0 c& r' m7 p0 W+ @
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FBS最好灭活一下

南宫燚岚

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消化下来的细胞完全够用了，所以瓶底那些没掉下来的扔掉就可以了。
- b3 ^6 w# k9 Q& |4 ?( }$ j另外，不要让MEF长得太满，100%已经是上限了，只要90%以上就能传代，如果你发现MEF长得很快的话，那在传代时可以采取1:3以上的比例，然后舍弃一部分呗。
1 S% `9 O' h/ J4 Y4 i# w这是我分MEF时的图片：（不知为什么你们的都是紫色的？是CCD的关系么？）
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7 V, t! w$ \# ~' O! P8 x- f" w8 H" F分完第一天，因为是体视镜分离，去头尾四肢，所以细胞数比较少5 Z/ h" S$ w7 p  L" v1 _

2012-11-14 08:56 上传

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# }% _& }, Q% ~+ z+ x+ I第二天就长起来了( B, g4 W- Y: W- k, T2 c$ J* G2 ~

2012-11-14 08:56 上传

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第三天就该传代了* g" P4 q/ v: s' b

2012-11-14 08:58 上传

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原代第三天，需要传代了

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& A+ U9 J/ h+ k8 j两代过后，细胞纯度有所改善
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2012-11-14 08:58 上传

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传代两次后