MSC这种状态如何预防及处理

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最近养人骨髓MSC，原代形态还可以，第一及第二代就出现很多黑色颗粒，然后细胞过几天就死了，不知道是不是传说中的黑胶虫。出现这种情况应该怎么处理，如果只能丢弃的话，那这种应该怎么预防，最近已经连续出现四五批了。无菌操作应该没什么问题，培养液用的是低糖DMEM加10%GIBCO胎牛血清和1%双抗，请各位大神多提建议。

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回复 huajie881026 的帖子" J1 ~- d5 _% X3 U- c7 Y$ z

$ o+ b9 Q' r6 O  H& h7 a+ v/ V3 P胰酶消化最近都1min之内的，而且胰酶消化时PBS洗了之后留了1ml，然后胰酶加1ml。我之前做过药物诱导的衰老和复制性衰老，形态都不是这个样子，只是胞内颗粒增多，而且能维持很长时间。现在这种状态过几天细胞就死了，感觉好像细胞膜破裂，然后细胞间也有很多颗粒

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回复 lql2006wh 的帖子  u2 Y" C( b) Y0 Q

6 F- ]3 `1 {3 _' ]就我自己养的细胞也有不同批次对同样血清同样培养液下不同的状态，有的细胞状态还可以，有的就出现这种很多的黑色颗粒，细胞很快死亡。

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回复 sdyinong 的帖子" w( F8 K0 p; y1 j

2 u6 d; D" l; p. q传代时细胞数目可能是一方面原因，我同样的两瓶细胞传代和接种到孔板和另外的培养瓶，孔板里细胞较稀，就出现这种情况，而另一瓶细胞接种较密，3天就长满，这种黑色颗粒也很少，状态还可以。但是以前也经常接种到孔板的时候较稀，也没有出现过这种情况，就上个月出现到现在一直有

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回复 cartoonyang 的帖子
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  o8 E/ p5 C$ P' R第三种抗生素一般用什么，现在实验室有两性霉素B，不知道有没有用

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回复 lovesxj941 的帖子/ a" A; Q5 [) H1 W) t8 y

& `( `, C9 H6 t上个月倒是换过不同公司的培养基，后来考虑到会不会是这个原因，又换了进口的DMEM，还是会出现，而且用同样的培养基，有的细胞没影响，有的细胞就这样。出现这种情况的细胞原代都很好，10-14天就长满，然后传代后有的细胞梭形两侧在显微镜下观察会有亮点，感觉就状态不太好了，然后就慢慢出现黑色颗粒，原代照片暂时还没有。细胞类似浓度以前也试过没什么问题，不过这黑色颗粒倒是跟接种密度有点成反比的样子。

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回复 cactus006 的帖子
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3 u2 Q' t6 r+ O. A# F/ r: r4 l非常感谢你的建议，我想培养基可能是一方面原因，这几天我用空培养发现培养基在孔板里好像也比较脏。以前如果出现一瓶细胞状态不好，黑色颗粒增加，其他状态好的细胞不会受影响。而现在一些好的细胞也会跟着变差，像是会传染，如果不是污染的话应该是共用的培养基及操作问题了。但是以前用相同的培养基，FBS都没有像现在这么严重过。下一次把GIBCO血清换成Hyclone的试试。

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最近做了空培养，发现有孔板里也有脏的东西，不知道这个会不会影响细胞状态。另外原代细胞培养时我发现也有细胞胞体发白的情况，是不是我的细胞原代就状态不好了，谢谢大家的建议！

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原代细胞