问个抽质粒的问题，Cartidge可以用布氏漏斗+滤纸代替吗？

mhqh

我用Qiagen的Mega方法抽质粒，就是一次能抽2.5mg的那种，加了P1，P2之后，有一步是过滤，把裂解的细菌啊蛋白啊什么的过滤掉。但是，Qiagen的那个叫Cartidge的一次性抽滤装置真心贵啊…… 我查了一下，可以用离心代替，但是离心好麻烦，因为溶液好多。 请问我可以用  布氏漏斗 + 滤纸 + 抽滤瓶  代替吗？  我感觉是可以的，但是没做过，抽质粒也没经验，请问有人做过吗？谢谢！

mhqh

/ X, S8 e1 a/ }* i
' y$ \% N; M" p' N; v" w9 W+ Z; H1 A
回复 86964109 的帖子/ {' a) u( ~# Q6 ?/ h
8 w9 r) U" _4 x+ _) L
谢谢你的回复！！！' \! W5 |  S. y; S' X; b
3 x" {) ]! |3 ~) z7 I' n1 m9 k
不过，你好像误解我的意思了。。。 异丙醇沉淀离心是最后几步吧？ 我的理解是这样的： 先裂解细菌，然后过滤，把裂解物啊残骸啊蛋白啊去掉（我问的是这一步）（据说这一步可以离心，渣滓就沉下去了，取上清液，但是好麻烦，因为加了P1，P2，P3之后，溶液至少150mL了），DNA在过滤下来的滤液里。然后用Qiagen-tip过柱子吸附DNA，最后才是异丙醇沉淀DNA离心得到DNA……
3 I; B1 I! t0 F+ g1 Z; Y  q
' D9 d7 ~" C/ p+ N  p2 R其中，过滤那一步，Qiagen的那个叫Cartidge的装置真心贵啊…… 感觉原理上就和化学上最经常用的布氏漏斗抽滤装置一样，不知道能不能用布氏漏斗？谢谢你！

mhqh

回复 86964109 的帖子
( S7 }. K& e; N7 v# m( \, r0 r1 y
) @/ z: U) I$ M# ~7 S% t谢谢你！！～

mhqh

回复 weiyepan 的帖子" \3 m8 v" z4 T/ O1 J# \. S

' x; M1 @6 m0 g; {6 |您好！谢谢！1 O* m1 E3 J' T2 }. a& g

4 ~# j" E" A) o9 t# _* F+ M* J还有个问题，抽滤之后，有一步是，加 50mL buffer FWB2，我等到菌液都抽滤下去后，滤纸都被堵住了，再加FWB2就很难滤下去了，然后我就直接往底下的滤液里面加了... 这样操作会有问题吗？我不知道FWB2是干什么用的...

mhqh

回复 weiyepan 的帖子* s$ ]+ R9 K% Q. G
. ^: Y( t. D7 b; q. S* ?& `$ _* \
如图

2012-12-1 01:12 上传

下载附件 (54.16 KB)

2012-12-1 01:16 上传

下载附件 (65.84 KB)

2012-12-1 01:16 上传

下载附件 (56.02 KB)

mhqh

! l7 Q0 a. Q2 I! O; V$ y

" }3 _1 r6 b, f* p% y$ e/ A回复 weiyepan 的帖子& `* _; _# H2 f" Q7 |
5 [" l- o0 W! Y- h
你好！我把我做的的配方和流程贴上来了，按qiagen的Mega方法做。今天又抽提了一次，没加FWB2，最后好像也能抽出来DNA，我不知道加不加FWB2对产物会不会有什么影响？我不知道FWB2有什么用…… 配方和流程见楼上的图0 ]  U' s9 G# ]2 V0 r  @

8 A2 t0 H% \6 L6 d0 z: G, G5 K7 D2 v6 V6 m2 W7 U7 A2 ^
还有，可以麻烦你把你说的那个什么MN的链接贴一下吗？我找了，没找到啊...囧... 不要鄙视我...
. u& @: s' t1 a# L& G  |0 p+ J! y, [
; c1 t/ {. r1 _" }再次感谢！
0 t: G4 S& U9 z/ N# G5 n

mhqh

回复 rexhz 的帖子
! S  b9 C) i1 P" _5 e& v! Z4 ]7 m& Y9 L' V: F9 C1 b
求链接…… 谢谢！

mhqh

回复 zhangtcm 的帖子
6 M  c" [: a7 k+ f: V+ _: I. c- K  m
求链接……谢谢

mhqh

回复 zhangtcm 的帖子+ C' X, t; W- K9 |4 ^- E0 D
' V# ]( l5 v& a% R+ W1 E4 M
求链接……谢谢

mhqh

回复 sunnh11 的帖子4 @) ?! ~: K3 V2 Y% D8 ?
  \* @% d3 M! H! `5 f5 H7 l
谢谢！
" ^9 C& V/ Y* H7 Z# k+ D4 L- p9 P6 z, |2 G. K9 k+ o8 B
我有个问题，你是用抽滤还是常压过滤？就是我用布氏漏斗抽滤，就是底下用水泵抽，然后很快就漏下去，但是，抽了之后，蛋白质就把滤纸的孔堵住了，用那个FWB2的时候，就再也抽不下去了... 怎么办？