求脐带间充质干细胞酶解法

xuzhijuan1989

查阅相关文献说脐带酶解法用胶原酶和胰蛋白酶先后各消化30min，想请问下，胶原酶消化后需要离心吗或者怎么去掉胶原酶？消化后的液体很粘，很难过滤，请问应该怎么解决？过滤选择怎样的滤器比较好呢？现在用的是300目的，感觉效果不是很好，望各位前辈指教，谢谢！

youlesi888

用点PBS缓冲液来稀释，会简单点

夏日晨星

我们之前也是酶解法，直接加2ml血清就可以，不用稀释神马的~ 现在用的爬片，个人感觉比酶解方便多了

湖南干细胞

回复 caiyu07248 的帖子1 E1 v7 d) q( F# A. Q5 N: E
1 Z9 j* ^8 y* {, n: M
那你的离心参数如何，最总离心下了的间充质细胞多不？
# k5 Z, S8 P7 U+ E我因为没有细胞筛，首先加PBS稀释，2500转/分，15min离心，弃上清；8 D& p4 s! F( n3 Q+ n" P
再加PBS稀释，1000转/分，5min离心；留上清，
# p% j( B: [0 }/ s0 n: J' r9 c* z再加PBS稀释，2500转/分，5min离心，弃上清，离心管底基本上没有细胞有一些膜一样的白色物质，可以吹散。
0 K+ j2 C* ^# u% n) P/ {& z添加培养基吹散，加入铺好多聚的培养瓶培养，镜下观察发现细胞很少。我的一条脐带十多厘米，剥离动静脉后，剪成2-4mm3小块，消化4h后经过上述，离心步骤，得到的细胞很少。求助啊。

细胞海洋

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笨球球开心

回复 mkhorse 的帖子
3 L! t; u; U* v4 K& r# c+ F* n/ _8 m+ s* \9 `9 V
组织块法步骤是怎样？？求助，谢谢！！1

笨球球开心

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. R5 ^0 a7 B3 W" R; r& Q$ U1 o
3 [. ?- ^6 [- ?7 v4 o( c( d你用的组织块体积：胶原酶比值？一般消化多久？消化终止是什么状态？有图片最好……求助……谢谢
4 O4 B. x* O6 r* O7 B  g4 }

笨球球开心

回复 caiyu07248 的帖子9 j( A! {' p4 P. f4 u7 v9 V! i9 e

; [( j5 I$ s* K6 X那请问转速多少，几分钟较好？？5 |% @5 F5 d2 D( h2 p: T

452359357

回复 弑之使徒 的帖子0 K/ }  S# c- A) b& \4 U* S

( g! |/ e. W$ o) ]我们直接用100目的过滤， 要中和胶原酶 胰酶直接加1-2ml的血清就可以了 不用离心的

弑之使徒

用点PBS缓冲液来稀释，再用200目过滤吧，这样会轻松点的~