做流式鉴定的抗体可以做免疫荧光？？？

huajie881026

今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的抗体可以做免疫荧光吗？查了BD的网站，有的既可以做流式又可以做荧光，我买的抗体上面只写了流式，这样是不是说明不能做了呢？做流式的抗体和做荧光的抗体有什么区别吗？？？在此请教！

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流式抗体一般可做免疫荧光，但反之则不然

cinderella颖

huajie881026 发表于 2012-11-29 22:09
& \  K  }$ W( b3 @* y* b) P今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的 ...

" ^  D9 V8 A5 S/ F7 q7 W) h  G老师，我之前发的帖子，您有空可以去看看嘛？谢谢。http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... p;page=4#pid1223827

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cinderella颖

huajie881026 发表于 2012-11-29 22:09 $ S$ t( y; ]1 q1 M' s: D
今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的 ...

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老师您好，我也要做MSC的流式和免疫荧光。看了您的帖子，想问，我手里有abcam做免疫荧光的抗体拿来做流式可以吗？不是直接标记的。谢谢

receiver1

流式和免疫荧光的原理是相同的，做流式的抗体一般可以用于免疫荧光。但由于流式抗体很多都是直标的，抗体直接带标记，因此容易淬灭。而普通抗体选用二抗，实际上有一定的信号放大作用，信号相对较强。当然如果流式抗体不是直标而是选用二抗的话，那就一样了。我一般不用直标的抗体，而是自己根据流式细胞仪的信号通道选用抗体，因为有的时候需要同时用几种抗体，间标（用二抗）的选择起来灵活些。

sun_happone

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这个看说明书就好了，没有特定的稀释比例的，每个抗体不一定一样。

huajie881026

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那抗体稀释比例多少较好呢？

sun_happone

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1 o. ]5 Y' n% L8 R- ?" Q. f8 p* _# M% t
是否要破膜，要看你在膜上表达还是在核内，如果在膜上，就不需要破膜，染DAPI不需要破膜的，另外，封闭的话做好用3%BSA，有血清BLOCK更好。

meister

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( V, ?; G, S- _/ APFA固定，都要破膜处理