跪问：质粒DNA溶液可以过滤吗？

筑草为城

我的质粒被污染了，但是已经没有多余的了，马上提又来不及。我想问各位大侠，质粒DNA溶液可以用0.2微米的滤器过滤吗？我现在有的是sartorius stedim公司的滤器，滤膜材质为PES膜，滤完后DNA会被阻止在膜外吗？

祁门红茶

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- W3 M/ D$ C- w7 z5 {, Q2倍体积的无水乙醇，再加十分之一体积的3M醋酸钠，沉淀后静置5min，12000转离心10min，75%乙醇洗两遍，超净台吹干，无菌TE溶解。基本不会有损失，另外溶解时体积小些，DNA浓度高易保存，不容易降解。

ghfvcat

不可以，损失相当之大。3 ^& x& x1 I/ I
重新做一下乙醇沉淀也很方便啊，

lxm5668

支持zhangtcm的观点。过滤之后浓度会降低。
5 H; H3 [8 ]" X0 ~  L' z/ J另外，你的质粒怎么知道污染了呢？其实提取质粒就是从大肠杆菌中提取出来的，而且提取过程很粗放，不需要无菌操作。如果是转染细胞发生了污染，你最好看看其他的试剂是否出现了问题。

zhangtcm

7 v& u$ ~% l/ K0 R; k
9 m- x6 j% p" }& u. \回复 筑草为城 的帖子
" W. T) u7 ?4 p# V- y上面的答复都是下策
% U& r) u' Y9 l质粒被什么污染了? 如果质粒很要紧的话，建议你转一下感受态细胞，扩增一下，再提取一下就可以了，也没必要担心质粒少的问题了，可以放心大胆浪费了

筑草为城

回复 86964109 的帖子6 r1 j4 m9 G' c# p2 S; D4 \
' s: b: a, c- s7 q  h% K. M
感谢了。那过滤后能还会有个400 ng/μl吧，呵呵

86964109

4 Y( b. |" V: D' y8 W; o5 P% O+ n0 y1 ?% e' c
回复 筑草为城 的帖子1 |7 @* d5 G/ S% Q) ]. v1 Z8 \% k

. S: ~+ {% ]" t# v你说的是0.5μg/μl吧，这样的的话浓度也不是很高，肯定会有损失，你要是转染的或怎么也得400-500ng/μl，一般1-1.5μg/μl ，1.5-2ml左右，感觉还是可以过滤一下的，要不你考虑下楼上几位的，不过不管怎样都会有损失，沉淀可能也会损失一半左右，就看损失后还能否达到你的实验要求

kastanie

尝试下再次用酒精沉淀呢

细胞海洋

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; Z9 P3 a$ s0 q
3 f8 K' K/ \5 t0 T你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样' M- L6 z- L! l. {% H4 n" B

5 |$ Q4 B! X0 A+ g, m! p否则他会看不到
) d8 W) c' j1 Y5 S

Roden

污染不多的话，可以考虑直接煮沸