跪问：质粒DNA溶液可以过滤吗？

筑草为城

我的质粒被污染了，但是已经没有多余的了，马上提又来不及。我想问各位大侠，质粒DNA溶液可以用0.2微米的滤器过滤吗？我现在有的是sartorius stedim公司的滤器，滤膜材质为PES膜，滤完后DNA会被阻止在膜外吗？

86964109

/ ^0 a- ], j8 h! M

" u  j5 ^2 A; M' q# l  ]5 q$ D; j回复 筑草为城 的帖子2 |! g. }0 [: `

" {$ w/ d) n# E  I7 f! ^3 R2 O3 \应该是可以的，只要你的质粒溶液体积、浓度够大

筑草为城

请问楼上，您说的体积、浓度够大，指的是多大啊，我的是1.5ml ，浓度是0.5 微克/ml，过滤后体积或许有损失，但浓度会减小吗？

sunnh11

一般滤膜都会不同程度地吸附核酸。既然你有1.5毫升，你可以试试重新用酒精沉淀一次。

Roden

污染不多的话，可以考虑直接煮沸

细胞海洋

回复 筑草为城 的帖子7 ?) k( u' k; b, G9 r5 H2 a
: s, `3 w2 K3 {6 x' Z
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
* I7 n) [: [6 x# d4 i; k2 h
2 |" l/ X" ~1 V+ H否则他会看不到
! r6 S5 }9 w5 j* [' w4 g6 Z- B  F

kastanie

尝试下再次用酒精沉淀呢

86964109

+ S. y( T9 J8 n- P5 p# `
' {- A: j" X( B5 J+ k5 @8 Q) \7 g/ H; {回复 筑草为城 的帖子3 s* q  g! B/ y' ]% L" ^; ?" E
# u9 G' ?% r. K5 v& {
你说的是0.5μg/μl吧，这样的的话浓度也不是很高，肯定会有损失，你要是转染的或怎么也得400-500ng/μl，一般1-1.5μg/μl ，1.5-2ml左右，感觉还是可以过滤一下的，要不你考虑下楼上几位的，不过不管怎样都会有损失，沉淀可能也会损失一半左右，就看损失后还能否达到你的实验要求

筑草为城

回复 86964109 的帖子9 W" h# f  e% G: f

- c# H6 ^' g! d7 U+ A感谢了。那过滤后能还会有个400 ng/μl吧，呵呵

zhangtcm

' p, n: P9 y6 o5 y* V2 ^$ {1 D$ H! U
回复 筑草为城 的帖子6 ?- [/ T. j& F3 y0 |5 b, ^2 f0 h  i
上面的答复都是下策1 J2 }$ h% C2 v! n
质粒被什么污染了? 如果质粒很要紧的话，建议你转一下感受态细胞，扩增一下，再提取一下就可以了，也没必要担心质粒少的问题了，可以放心大胆浪费了