单个核细胞分离无白膜层原因

zhuzhentulip

        我用15ml离心管分离5ml稀释全血（1：1）Ficoll分离液2.5ml，稀释全血与Ficoll分离液的比例是2：1，2000转20分钟离心，能得到较清晰的白膜层。后来我要分离50ml稀释全血的单个核细胞，分为4个15ml离心管分离，每管加Ficoll分离液2.5ml，稀释全血12ml左右，2000转20分钟离心，这样经常得不到白膜层，偶尔可以得到白膜层，是不是Ficoll分离液太少了啊？是不是Ficoll分离液与稀释全血的比例要1：1到1：2为宜呢？, d9 x7 X8 a6 o0 n& o  o8 e& r/ D5 b
    如果用50ml的离心管来分离单个核细胞可以不，有人说液面大了分离效果不好，如果我用2支50ml的离心管来分离50ml稀释全血（1：1），每管25ml稀释全血，加到12.5mlFicoll分离液面上，Ficoll分离液与稀释全血的比例为1：2，2000转20分钟离心能得到较清晰的白膜层呢？

312473313

FICOLL：血 1:1.5-1：2。注意加样和离心，加样不要破坏界面，离心慢升慢降

小刘

稀释时血液跟稀释液要大于1:1,稀释后的血液跟分离液也要大于1:1，并且不能破坏分离液液面

kelinzjf

用50ml离心管就可以了

淘知路遥

我们是1:2，50ml血液不稀释，平均加到两个50ml离心管，分离效果挺好的

sky512829

进来学习

Natalie

可能是离心机的参数设置的不好，也可能是淋巴细胞分离液的比例太低了，最好1：1.25-1:1.5之间

ybql

回复 lyj-0017 的帖子( h% ?+ E9 i* D+ |) @! s- V
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50ml抗凝血，分两管每管25ml离心后去血浆，每管用PBS等体积稀释后，再用1：1-1.5的分离液离心

小刘

离心参数太大，离不见了，或者离心力不够没分离开，看一下分离液有问题么，再看一下分的血各项指标都正常吗

hwlightning

回复 吕小松 的帖子
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7 G4 B, E. Y0 p6 [你Ficoll的量是不是少了一点，我们也用的天津灏阳的，现在天津灏阳科研级别的Ficoll分离效果变差了，所以我改用了临床级别的。
0 m' `, }' k& L! Y还有就是不同人的血分离效果也不同（特别是肿瘤患者）。其实这些对你培养细胞影响不会很大。