胎盘干细胞分离培养疑问 求解答

ag2017

昨天初次进行胎盘干细胞分离培养，初步完成。得到一些大神指导。谢谢。还有一些疑问请教各路高手" q# x$ [" f5 B, [, E$ j
1、胎盘组织的取材，取哪一块好？
: D6 c# V2 h1 z2 Z7 o2、如何将胎盘组织羊膜、绒毛、蜕膜分离开？% x/ r( E5 V( U8 E/ E4 J0 @
3、我使用的是胶原1酶，消化20分钟消化效果不好。请问选择什么酶？消化多长时间效果好？
/ Q2 g; a& M9 O4、培养时没把握好，混匀分装培养瓶中发现好像组织块密度太大？该如何处理？组织块大小及密度多少较适宜？
1 H- u8 n, m, `0 V5 p/ N5、使用的培养基是87%DMEN,10%FBS,1%L-谷氨酰胺，1%清链霉素。可以吗？请问有成品胎盘干细胞培养基卖吗？
# k8 C( G$ ]9 I% @% c9 G6、如果一切正常的话，大概多长时间有细胞长出贴壁。
( X8 [+ }0 Q7 u& n. i$ Z$ V谢谢   

mkhorse

我们这里都是消化一个小时，而且需要保证温度，每隔一段时间就摇动一次。种瓶时是用的消化下来的细胞，不用组织块种瓶

levell

1、胎盘组织的取材，取哪一块好？
7 d/ v/ K  n' o7 X0 U, S. s    胎盘绒毛膜和基蜕膜，分别是胎儿来源与母体来源，两侧是不一样的基因型，看你自己的目的了。* m! P& l! S- [) V6 N/ Y) C! ?
2 如何将胎盘组织羊膜、绒毛、蜕膜分离开？% P4 x- ~- R7 U. ?/ Z# T/ ]
    羊膜用镊子轻轻撕下来就好啊，
) g; U2 d: Z8 l9 K7 u2 G3我使用的是胶原1酶，消化20分钟消化效果不好。请问选择什么酶？消化多长时间效果好？( {/ y- h2 Y9 H/ q" Q
    不同的酶消化作用不一样，我用过胶原酶1、胶原酶4、dispase2，首先尽量将组织剪碎，37度消化，中间不时震荡一下，一般60分钟到两小时之间吧。! l& I. P3 {6 ?/ G' w7 H
4、培养时没把握好，混匀分装培养瓶中发现好像组织块密度太大？该如何处理？组织块大小及密度多少较适宜？$ u/ U7 B  _* k" i6 o2 o, r
    怎么会有明显的组织块呢，消化后要过100微米和40微米的细胞筛两次，基本不会有太多的组织块的。
0 {: [& g  M9 q- o# z$ s4 c, Q5、使用的培养基是87%DMEN,10%FBS,1%L-谷氨酰胺，1%清链霉素。可以吗？请问有成品胎盘干细胞培养基卖吗？
: W; f9 A1 J0 B+ D) N4 D    可以，只要是进口血清就没有问题，一定要是低糖的DMEM
. m3 m/ @, Z1 Y# q- M6、如果一切正常的话，大概多长时间有细胞长出贴壁。5 N4 y4 J. ~5 M7 W+ P; Q: E; w* p
    5-7天就能见到，一般种进去24小时首次换液，将半悬浮的杂细胞一定要洗干净。