胎盘干细胞分离培养疑问 求解答

ag2017

昨天初次进行胎盘干细胞分离培养，初步完成。得到一些大神指导。谢谢。还有一些疑问请教各路高手
0 D, x0 ^: P0 P, E, ~1、胎盘组织的取材，取哪一块好？
! S* }9 d4 ?# Z4 E  d2、如何将胎盘组织羊膜、绒毛、蜕膜分离开？
$ E- D  L5 O# e3、我使用的是胶原1酶，消化20分钟消化效果不好。请问选择什么酶？消化多长时间效果好？
8 e; G4 U# ?4 d. F  O) U4、培养时没把握好，混匀分装培养瓶中发现好像组织块密度太大？该如何处理？组织块大小及密度多少较适宜？
; l! U+ G0 a9 O* _3 [& U5、使用的培养基是87%DMEN,10%FBS,1%L-谷氨酰胺，1%清链霉素。可以吗？请问有成品胎盘干细胞培养基卖吗？
% _, M' k  W9 h' E6 v) T: Q6、如果一切正常的话，大概多长时间有细胞长出贴壁。
. F7 x( F/ s9 o  G7 B谢谢   

mkhorse

我们这里都是消化一个小时，而且需要保证温度，每隔一段时间就摇动一次。种瓶时是用的消化下来的细胞，不用组织块种瓶

levell

1、胎盘组织的取材，取哪一块好？) L3 T/ c% T- j+ B; t: \* p
    胎盘绒毛膜和基蜕膜，分别是胎儿来源与母体来源，两侧是不一样的基因型，看你自己的目的了。: _( N. I# X4 F& M$ C! g/ F
2 如何将胎盘组织羊膜、绒毛、蜕膜分离开？
3 k! c# v: r# W    羊膜用镊子轻轻撕下来就好啊，
4 T! p5 @9 E/ e+ _  k' q6 M3我使用的是胶原1酶，消化20分钟消化效果不好。请问选择什么酶？消化多长时间效果好？' [6 x# H, @' J/ V# j, I, k
    不同的酶消化作用不一样，我用过胶原酶1、胶原酶4、dispase2，首先尽量将组织剪碎，37度消化，中间不时震荡一下，一般60分钟到两小时之间吧。
7 x' h5 i9 ~: M* W  ]' K4、培养时没把握好，混匀分装培养瓶中发现好像组织块密度太大？该如何处理？组织块大小及密度多少较适宜？# y5 d$ N- ~# I! n$ M
    怎么会有明显的组织块呢，消化后要过100微米和40微米的细胞筛两次，基本不会有太多的组织块的。& H4 d! \! \6 q2 N  m
5、使用的培养基是87%DMEN,10%FBS,1%L-谷氨酰胺，1%清链霉素。可以吗？请问有成品胎盘干细胞培养基卖吗？, U7 y( G' e9 Z: \& T. \8 z5 ~1 H# d
    可以，只要是进口血清就没有问题，一定要是低糖的DMEM
( v; G8 O! s% N; I) H# l6、如果一切正常的话，大概多长时间有细胞长出贴壁。
+ R* p5 X7 n  h% c. q    5-7天就能见到，一般种进去24小时首次换液，将半悬浮的杂细胞一定要洗干净。