分离小鼠脂肪干细胞和成熟脂肪细胞，上层的白色漂浮层是不是成熟的脂肪细胞？

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分离小鼠的成熟脂肪细胞和脂肪干细胞，发现消化过滤后，1500rpm，5min后上层有一层白色的漂浮物，不知道是不是成熟的脂肪细胞？下层的白色沉淀重悬之后直接接种到细胞瓶，没有贴壁的细胞。而上层的白色细胞层吸出来之后再离心纯化2遍，最后观察得到的脂肪细胞很少，不知道怎么回事？按理说脂肪组织分离成熟脂肪细胞很容易，会得到很多细胞，但是我分离之后发现成熟脂肪细胞很少，不知道是哪个环节出了问题？高手们给点建议！

相宜

个人拙见：1 下层的白色沉淀没有获得理论中的细胞---消化酶的问题。胶原酶消化不彻底。
; ?8 h0 b% ~- v, g          2 上层的白色物质就不好说了，有可能是脂肪细胞，也有可能是没有消化彻底的筋膜或者其他杂质。4 D' m% j: ^: }( [  V' m
建议：消化酶的温度、摇床速率和消化时间都要重新设计，直至消化完全。

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消化后加培养基混匀，过200目细胞筛的，下层白色沉淀接种后发现有很多脂肪细胞，前一次分SV细胞分出来了，但是这一次没分出来，很是让人郁闷啊

liyujuanmarry

1 脂肪加入胶原酶后建议用200rpm/min的恒温振荡仪充分消化；1 B' r8 u& o; B# v
2 消化离心后保留管底的白色沉淀（SVF细胞或其他组织）；& K2 k9 g. N! K. t+ o- x
3 将沉淀重悬后用100um无菌滤器过滤掉其他杂质；* i  J' \& T  d3 B
4 接种细胞，定时换液、传代，相信细胞一定能长得很不错

pxw514477866

回复 相宜 的帖子, E1 M: }% W/ h

* W# v7 a# w, T, R8 f这两天又分了一次，发现上层漂浮物后来过了400目细胞筛之后就没有，个人感觉好像是筋膜或者小的组织块，我要分ADSC，也要分上层的成熟脂肪细胞，感觉成熟脂肪细胞比ADSC还难分