诱导ips的外源转录因子整合到细胞基因组为什么表达又沉默了？

lssfanny

  请问大家，用病毒诱导ips的时候外源的那几个转录因子整合到细胞基因组后，为什么表达又沉默了？ 有些文章为什么要检测外源转录因子整合到细胞基因组了？ 谢谢高手能够解答！

genedu

在小鼠的iPS的干性达到一定的程度之后，它维持干性的通路不需要外源因子的表达，可以完全靠自身来进行维持，这个时候外源诱导因子就会选择沉默，从目前的文献来看，用病毒诱导iPS细胞不可能用来临床应用，因为其外源基因虽然沉默，但是并不能祛除，比较流行的方法是episomal vector等非整合系统

yuhaoze

沉默是因为用的是CMV启动子

lssfanny

回复 genedu 的帖子( N0 O% y7 ~# M+ X
' T7 e0 B1 w& J  ]
谢谢你的回答:)

lssfanny

回复 yuhaoze 的帖子! i5 y# x7 ]* G( T
- n8 p3 x0 p+ n9 z# v( v
能详细的介绍一下吗？谢谢:)

yuhaoze

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1 g4 M( T# y; j/ B7 M, \* H* y4 A7 X1 V, \
CMV启动子在干细胞（包括IPS）里特异性不表达，所以尽管质粒整合到了基因组里面，外源基因仍然沉默了，如果质粒用的不是CMV启动子，而是其他启动子的话，外源基因是没有理由（也不可能）沉默的，oskm四个导入的基因同内源的一起表达，就分不开了。( h$ E: `# A' T4 Y
所以IPS在选择质粒的时候最好选用CMV启动子的，这样就避免了很多麻烦。
" ^$ |' O8 k; ggenedu说的很对，episomal vector比慢病毒好的一点就是它不整合，没有危险，你可以试试。

lssfanny

回复 yuhaoze 的帖子9 ~9 J* H; ?8 U

5 X, s* F6 g* \1 H% ]5 F学习了很多，非常感谢！

sirius_zou

yuhaoze 发表于 2012-12-24 00:20 . y2 t- I" Y; j* J0 |
回复 lssfanny 的帖子; r" [7 y9 ~  s, n" U4 z
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CMV启动子在干细胞（包括IPS）里特异性不表达，所以尽管质粒整合到了基因组里面，外 ...

: i  c7 H& b: k' L9 |4 L  B* W
学习了) O. [9 k! |- n: a; a
我想请教一下，我的系统是EF1a启动子，外源基因就不会沉默了吗？
; d7 v9 p7 q* d9 YPCR检测时只能够用不同的引物把内外源分开了

yuhaoze

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* y' d2 ]" O! S7 ?9 a- O
! T3 t3 ?% v0 ?) A0 o( j5 S- q4 |是这样

wbj1983

回复 lssfanny 的帖子
: |* @! m- ^6 g) T& e) H+ @4 {" _0 N- O7 U
因为，诱导用的KSOC毕竟是外源基因，如果外源基因整合到基因组中或多或少肯对基因表达调控有所影响，所以，研究者一直的做法就是先通过外源基因来激活内源干性基因后目的性的将把诱导时用的外源基因沉默掉。比如TET-ON,TET-OFF系统中，通过加DOX来激活外源基因的表达，当诱导一定时间（我们通常4-6天就会有ips克隆）后撤掉DOX，这样能够达到沉默外源基因的效果。希望对您的疑惑有所帮助！共同加油！