细胞计数和流式

荣荣荣

我进行细胞计数，一个长满细胞的T75，细胞不到10 7，但离心下来很多细胞，拿去做流失，200ul只用10ul，用了100 000细胞，有没有可能是计数板有问题啊，我吹打后马上进行的计数，比人用好像也没有什么问题，我计了很多次，数量都很少。请大家分析个原因给个解决办法。

cneagle66

流式中，100000不一定全是细胞，碎片也计入了。

pengxuleo

应该没有问题的，MSC细胞比较大，T-75长满的话大概在6-8x10e6个细胞吧，你不是用所有细胞去流式了吧？( c6 w' l  g8 m3 |. A& F
5 V1 E  Y0 \7 d! v0 O" d
题外话：小建议：200ul只用了10ul，说明你的细胞浓度太高了，流式有个合适的检测范围的（high 1200/秒）细胞浓度太高，对结果不是很好

荣荣荣

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- a5 e8 b$ q2 z7 G( |2 s2 `- c
) B  h+ c5 }  B" F. Q* F8 M就是做流式只要细胞够就行，也不用太多细胞。106/ML的密度，100 ul就够了？

wind789

荣荣荣 发表于 2012-12-25 10:41
9 P2 l' j+ M9 S2 j9 n. X回复 cneagle66 的帖子
4 r  q4 |$ |2 ~; n/ w4 v
, K5 F  y4 P. r$ p; R2 V就是做流式只要细胞够就行，也不用太多细胞。106/ML的密度，100 ul就够了？

. a1 \$ L( s  O4 |; E8 A' W- K6 M
这个密度，我一般是200ul每管加抗体，还要考虑到离心和上机时数量的损失。10000个细胞就够了。细胞太少跑出来的图不漂亮。

lyj-0017

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# D8 Z2 p$ S* e* e5 h! L4 k- I) G% k1 t: t: m
请问你养的是什么细胞？计数板是用的常用的血球计数板吗？能否具体说明一下你是如何计数和计算？这样大家能更明白你的问题出在哪里。

lyj-0017

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9 |7 {. ^9 f6 f% l3 I7 h$ }( K3 V1 b, K3 e/ X6 n; `" e
恩，说的很对，但一般来讲，在进行流式时，操作者已经设定好阈值将细胞碎片排除掉了吧，如果这样的话，楼主说的100000个细胞应该就是纯粹的细胞数量吧

lyj-0017

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" D" w+ g- t6 V' S3 f) D8 a0 F4 p  t5 \! \
我觉得保险起见，在加抗体时细胞量最好还是稍微大点好吧，5X10^5个如何？

荣荣荣

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* U  u2 a# V: D$ \% f; g; D& _% B- L8 e  T* F9 I3 j
MSC（4个大格细胞总数/4）×104个/ml ，流式设了门，流式10000是细胞数量 $ O; N, @3 u4 N; l
问题在我自己计数与流式显示的细胞数不一样。
  c, M6 B) a. ?) r4 h

wind789

lyj-0017 发表于 2012-12-26 10:02 & P9 r3 x2 x0 O: A3 T
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8 E" k/ d& s+ W- [' j4 I7 m/ d- m1 J. B! m/ x
我觉得保险起见，在加抗体时细胞量最好还是稍微大点好吧，5X10^5个如何？

) A5 h: x8 w( ]  K那是越多越好撒，但是有时候我就只养个皿，没有那么多细胞撒。养得多的话，多搞些也要得嘛。一般我那么多细胞出个图也够了。