质粒酶切检测如何选择酶切位点？

军医

双酶切注意：1.两个酶的反应温度是否相同，不同的活就要分两次酶切
+ |2 ~) f1 A# j3 [                     2.注意内切酶是否是对甲基化敏感，有的酶需要用GM110这样的菌株转化，得到的质粒才能被切开。
* x: d* U0 A1 w$ V                     3.两种酶是否有公用的buffer，无公用的buffer的话就要分两次切了。; y7 N( V3 C3 \( |6 q
                     4.不要把目的片段切开，无论是双酶切还是单酶切都要选在质粒上有单个酶切位点的内切酶。
  r5 W& n! C( ?4 d- u' C                      5.单酶切和双酶切最好都做，保险。1 f/ v7 Q8 n  e. H0 |
PCR检测：    1.引物一般设计在插入片段两侧，如果是别人给的商业化质粒，最好在用测序引物测下多克隆位点，防止多克隆位点有突变。8 k$ ~( ~+ Z) r% A/ _1 Y
                     2.如果是插入片段的话，最好测序鉴定一下。PCR产物只看大小就能确定了。
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