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染S100 和 GFAP的小问题
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作者:
等待feng
时间:
2013-1-25 23:40
标题:
染S100 和 GFAP的小问题
各位大仙 我前几天染免疫荧光，骨髓干干细胞诱导的，S100能染出来 但GFAP没染出来，能说名我诱导的是雪旺细胞吗？？求助啊 各位。。。实在是迷茫
作者:
dianying
时间:
2013-1-26 08:06
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回:染S100 和 GFAP的小问题
1 C) N, N8 Q3 N$ ~
这程子老回复不了跟帖，只好重起页了。
! H5 b) v8 H, M5 c6 h0 {& R( T- N
你是俩搁一块染不上呀？还是分着单染也染不上？
作者:
等待feng
时间:
2013-1-26 09:46
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dianying
的帖子
2 `3 [9 k, h0 w5 q
9 ~( O5 I+ ?, s6 k
分别染得，哥们。。只染上了S100没有染色GFAP
作者:
dianying
时间:
2013-1-26 15:17
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等待feng
的帖子
3 m( I; |! \: e/ W# U
7 ]( r+ J, C; D
你的二抗买了多久了？是不是过期了？
( i; G) U& ^& [2 m$ R( g( q
gFAP是抗兔的还是鼠的？用的什么blocking?
作者:
dianying
时间:
2013-1-26 15:17
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等待feng
的帖子
+ r" l2 n" u' \7 o; m: N8 a
}% e3 p3 g+ c8 d6 \3 x
你的二抗买了多久了？是不是过期了？
0 v: K1 r# n/ d5 R' Q: m! {
gFAP是抗兔的还是鼠的？用的什么blocking?
作者:
huangcong1988
时间:
2013-1-26 17:19
步骤？
4 X) m" F+ e2 o2 ~* \
作者:
huangcong1988
时间:
2013-1-26 17:19
你的免疫荧光步骤呢？
作者:
guofei5821
时间:
2013-1-26 18:50
不知道你二抗是否用对
作者:
细胞海洋
时间:
2013-1-26 22:26
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dianying
的帖子
\5 D! c; `, Y
1 L- T% J1 {; u. a! V
用的什么浏览器 提示什么 可以联系我的qq 572776999 我查一下什么原因
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 01:19
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dianying
的帖子
7 B. k5 M, C8 s& ?' R# C
( m5 d1 {! W$ \! H' @
二抗 应该没错 都是用的抗兔的 FITC 也没过期 十二月刚配的
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 01:21
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huangcong1988
的帖子
! v/ g" j3 l4 D! T
& h6 }1 t4 W6 W
步骤就是 PBS洗三遍 多聚甲醛固定30分 再洗三遍 加打孔的 然后再洗三遍 加一抗 4度冰箱过夜 第二天37度 一小时 然后洗三遍 加二抗，然后再三十七度一小时 然后PBS三遍 封片嘛 大家应该都这样做的啊
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 01:26
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guofei5821
的帖子
2 v3 }: Q$ Q$ h' O/ `1 B4 a* m& v
8 \5 N- O4 E/ ~0 ~' p& k
应该没问题 用时细心的看了
作者:
dianying
时间:
2013-1-27 11:04
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等待feng
的帖子
8 h# V0 k$ Y9 t, s* S
) z" j9 B3 v1 F
你还是先分着染，S100很容易染，先放放。
1 {+ U; L( J* J; @* F6 W
染gFAP:
, U; k- |5 g$ I6 {6 e
1)你固定的时间15分钟就可以；
3 w6 M: Z* j T2 d& F: [( U6 r
2)你的步骤里没有封闭
+ s M j' d3 W+ n
你先试试用5% BSA to block,用一半的blocking buffer 加你的一抗、二抗。一定要当天配的BSA。
, u; C$ s3 z* j6 F1 ^1 }
我不明白你为什么要配一抗，一抗不是买现成的吗？
作者:
dianying
时间:
2013-1-27 11:10
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细胞海洋
的帖子
3 N- _) z! r0 {1 Z$ z: X/ C+ |
% P1 P6 t9 p" A
谢谢你的提醒，我现在换成google chrome 了，这个没问题了。看来internet explorer 是要破产了，在别的地方也有同样的问题，只是没多想。
3 c/ ^$ j) j# U M1 C7 B
非常感谢！
作者:
dianying
时间:
2013-1-27 11:18
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等待feng
的帖子
- n L# J5 Q3 S% L
+ Y; Q" X9 x' o; H( n: B$ J7 e
也不尽然！如果你光看外表长得像猪八戒还不行，你还需要检查他是不是好吃和懒做...
4 _9 r; O! v8 \; a1 h/ d7 _
你光拿染色来下定义真的不够，还是要做一些功能上的检测。诱导过来的细胞本来就复杂，慢慢试。
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 17:29
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dianying
的帖子
7 q1 \# A; q# e; z4 R
8 j' d; C6 n5 B; T8 W/ E
细胞的免疫染色不用加BSA吧？一抗是买的现成的 但要稀释嘛
作者:
等待feng
时间:
2013-1-27 17:30
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dianying
的帖子
' |+ l5 w2 S2 z: j
: \# `: D0 k# _+ H% A4 M4 ]' u
你说的挺对，但荧光染色是前提嘛，如果连特异性抗体染色都染不上的话，功能什么的就更不是了。。。
作者:
dianying
时间:
2013-1-28 11:26
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等待feng
的帖子
9 K! m- ]( `! e0 D: Z' [. R
! w& P+ V, o+ N' ^- m' k) r
你不用BSA没关系，但是blocking 是必须的。
作者:
dianying
时间:
2013-1-28 11:28
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等待feng
的帖子
4 T% O+ C2 w$ E' Y+ |. u' K5 `4 M
9 c6 k6 M s) u: }' R- O
你说得也有道理，但是你染上了S100 没染上gFAP不能说是雪旺什么的，结论太早。
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