染S100 和 GFAP的小问题

等待feng

各位大仙  我前几天染免疫荧光，骨髓干干细胞诱导的，S100能染出来  但GFAP没染出来，能说名我诱导的是雪旺细胞吗？？求助啊 各位。。。实在是迷茫

dianying

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: f# _0 y1 b& S. f7 H+ ^你说得也有道理，但是你染上了S100 没染上gFAP不能说是雪旺什么的，结论太早。

dianying

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$ t6 R( b' s5 k+ m4 R
) w. s7 a  [  W7 O* I; M你不用BSA没关系，但是blocking 是必须的。

等待feng

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# o" M5 G' {% l6 z$ _
  K2 J# o& _# J4 e9 a# h你说的挺对，但荧光染色是前提嘛，如果连特异性抗体染色都染不上的话，功能什么的就更不是了。。。

等待feng

回复 dianying 的帖子# g6 g5 p! l# S9 E" e  M' y
& J$ V; l/ V5 C+ X) t* {
细胞的免疫染色不用加BSA吧？一抗是买的现成的  但要稀释嘛

dianying

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8 |, _% k  l, K2 z' u2 v$ J% p. g
$ f( L+ Z- u- G- l7 q- Z也不尽然！如果你光看外表长得像猪八戒还不行，你还需要检查他是不是好吃和懒做...5 J% b: j# v3 C4 f6 P5 q8 B% C* q
你光拿染色来下定义真的不够，还是要做一些功能上的检测。诱导过来的细胞本来就复杂，慢慢试。

dianying

回复 细胞海洋 的帖子- X* c1 U. I' Y. s( r
) j4 I& N+ f8 z! M5 Q
谢谢你的提醒，我现在换成google chrome 了，这个没问题了。看来internet explorer 是要破产了，在别的地方也有同样的问题，只是没多想。
% b& F+ O; b* `' V# P4 ^非常感谢！

dianying

回复 等待feng 的帖子, l! u) L1 m* s+ `3 i

) Y5 H/ N; |& r  q0 ^5 F  V9 `你还是先分着染，S100很容易染，先放放。
. e1 E, Z# u; V% L* D/ E染gFAP:
# B4 X8 H, p! O5 F7 s; P- S; z9 Q0 i) j: R 1)你固定的时间15分钟就可以；* P$ @& u! t9 D, |( H- i
2)你的步骤里没有封闭9 b4 k  n8 Q( k' ?; L: `% E
你先试试用5% BSA to block,用一半的blocking buffer 加你的一抗、二抗。一定要当天配的BSA。  b5 f- R* A5 L+ w
我不明白你为什么要配一抗，一抗不是买现成的吗？

等待feng

回复 guofei5821 的帖子7 ]) b+ u5 S3 \+ N! {5 ]

: h* p& F/ Y6 A% ~) Q8 B应该没问题   用时细心的看了

等待feng

回复 huangcong1988 的帖子
7 e7 H2 D0 c* B; k
4 M9 \3 \* t: R" g' H! z" E步骤就是  PBS洗三遍  多聚甲醛固定30分  再洗三遍  加打孔的  然后再洗三遍  加一抗  4度冰箱过夜 第二天37度 一小时 然后洗三遍  加二抗，然后再三十七度一小时   然后PBS三遍  封片嘛    大家应该都这样做的啊