酶消化法没有筛网怎么办

湖南干细胞

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6 V2 V# y$ g2 m" W' D. X我因为没有细胞筛，
* m% H) G3 e+ X①首先加PBS稀释，2500转/分，15min离心，弃上清；$ V( W+ o2 b' w+ }! d
②再加PBS稀释，1000转/分，5min离心；留上清，
5 c( P& N& x6 t- k; F3 p, W③再加PBS稀释，2500转/分，5min离心，弃上清，离心管底基本上没有细胞有一些膜一样的白色物质，可以吹散。; O. b, U. i& k7 O1 Y9 g# k
④添加培养基吹散，加入铺好多聚的培养瓶培养，镜下观察发现细胞很少。我的一条脐带十多厘米，剥离动静脉后，剪成2-4mm3小块，消化4h后经过上述，离心步骤，得到的细胞很少。求助啊。/ S: n; M7 \" `$ d" t2 ]* v6 _3 I
以前用过第①②步对调的方法，发现1000转离心时，组织块离心得不彻底，很容易在吸上清的时候吸上来，就基本上把下边粘稠的液体没有收集继续离心。最后的细胞液也很少。' `2 N5 v/ ^; {! W; V

evial

为什么没有细胞筛呢？这是必须的为啥不准备呢？1 D! o4 G  {& ^9 H2 L
这是谁教你的步骤啊！这样的步骤当然不可能有细胞！第一步用的转速太高，你要的东西在第二步被倒掉了。
, L% C: o  J- n! t. ^6 v就算没有细胞筛，可以把沉淀物放到培养基养起来。就是碎渣快快多一点啊！
6 u' U, y, _2 M9 ]' t1 m# A8 R我要是导师是要被气死的。

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: O- p1 H) i% ]& p: a7 \9 q' E1 Y" \7 r# z9 p$ {' u# Y$ N1 S, f
多谢指点。下边的组织块中确实有许多细胞，当时怕含有很多粘稠胶原酶及组织块的细胞悬液会养不活。

湖南干细胞

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另请教：0.1mg/ml 碧云天PLL铺被培养瓶后，立即用PBS洗2遍，感觉细胞贴壁效果不好。PLL铺被时间多长好？

老姜

离心需要注意的是：在50ml离心管中离心倒弃上清液会倒去大量的细胞。非要用此离心管离心可在离心后先用吸管将上层1/3或1/2的液体吸弃，不怕麻烦者可将吸在吸管中的液体滴一滴在玻片上，镜下观察是否有细胞，若没有课再吸弃一些上清液，余在管中的细胞丸和液体混匀后转移到15ml离心管中200g，离心，5-10min，细胞的收获量明显大于50ml离心管离心的细胞数。

coffee.cat105

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7 V+ p) ?( t5 U/ Q# r7 u我们用胶原酶消化的时候就会出现好多的胶状物，就裹着细胞一起，一过细胞筛都留在筛上了，怎么洗都洗不掉，请问一下这个怎么处理的好

coffee.cat105

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我们用胶原酶消化的时候就会出现好多的胶状物，就裹着细胞一起，一过细胞筛都留在筛上了，怎么洗都洗不掉，请问一下这个怎么处理的好

evial

消化完毕后用PBS清洗一下，多加一点PBS也就是稀释黏黏的胶原，可以加好几倍多用几个离心管洗干净，不能直接过网筛肯定会堵掉的。能贴壁的话加一点培养基放在培养箱等培养基干掉一时就贴住了，这就可以加培养基养起来了。

coffee.cat105

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) _" }2 F. N2 g0 f
必须是PBS吗？生理盐水行不行？

孙帅帅

必须要用细胞筛网啊！这样可以很方便的分离组织和MSCs！还有就是剥离动静脉后，华通氏胶质最好剪成1mm3小块，均匀平铺培养瓶底部。